생화학 기��고사 요약정��

Chap 5. 단백질의 정제 및 특성 규명 기술
5.1
＃ 한 단백질의 성질을 연구하려면 그 단백질로 구성된 시료가 필요하다.→ 분리 후 정제해야함
＃ 분리: 단백질의 크기, 전하, 극성에 따라 분리
＃ 정제: 물질에 섞인 불순물을 없애고 더 순수하게 하는 것
＃ 정제할수록 회수율은 감소하며, 비활성이 클수록 순도는 커진다. (표 5.1)
＃ 세포에서 단백질을 어떻게 얻어내는가?
↳ 균질화 → 분별원심분리 → 크로마토그래피, 전기영동
＃ 정제 전에 먼저 단백질을 세포왿� 소기관에서 방출시켜야 한다. ＃ (1) 균질화 (homogenization): 세포를 파괴하여 여는 과정
＃ 균질화 방법
① 완충용액과 함께 넣고 믹서로 가는 것 ② 포터-엘베헴 균질기 사용
③ 초음파 분해 ④ 냉동 해동 반복 ⑤ 세제 사용
＃ (2) 분별원심분리 (differential centrifugation)
→ 시료를 원심분리하면 파괴하지 않은 것들은 침전물로 남는다. 침전물은 버리고 원심력을 증
가시켜 상층액만 다시 원심분리한다. 이것을 반복하여 단백질 수용액을 얻는다. ＃ 단백질이 용해되면 용해도 차이에 의해 초벌 정제한다. ＃ 가염석출 (Saltingout): 염을 가하여 단백질을 석출한다.
→ 시약: 황산암모늄
＃ 단백질이 물과 상호작용하기 때문에 물에 녹아있는데 여기에 황산암모늄을 넣어준다.
→ 단백질에서 물이 빠져나왿�서 염과 이온-쌍극자결합을 생성한다.
→ 물이 빠져나간 단백질들은 소수성결합으로 상호작용한다.
→ 생성되는 침전물에 단백질이 포함되어 있다.
⇒ 즉, 단백질 수용액에 황산암모늄을 가하면 단백질의 침전이 생긴다. ＃ 가염석출로 얻은 단백질 침전물은 크로마토그래피왿� 전기영동으로 더 분리하면 된다. 5.2
＃ 정지상 (Stationary phase): TLC, 종이, 기둥
＃ 이동상 (Mobile phase): 용매
＃ 이동상은 정지상을 이루는 물질 위로 흐른다. 단백질 시료는 이 이동상과 함께 운반된다. ＃ 정지상과 성분의 친화력이 크면 느리게 나온다(운반된다).
＃ 정지상과 성분의 친화력이 작으면 빠르게 나온다(운반된다).