댿�장균군검사법(최확수법,균수정량법)

1. 목적 및 원리 (Principle)
대장균 군 검사법에는 액체배지 법 또는 고체배지 법 중 어느 것이나 사용할 수 있다 시료 중에 대장균 군이 존재하는 가를 검사하는 정성시험과 균수를 산출하는 정량시험이 있다. 모든 검사 방법은 추정시험, 확정시험, 완전시험의 세 가지 단계로 구성되어 있다.

▶ 액체배지 배양법
◎정성시험
①추정 시험(Presumptive test) →오늘 실험
시험 대상에 따라 BGLB(brilliant green lactose bile broth)배지왿� lactose broth배지를 사용하는 두가지 방법이 있으며 모두 durham발효관을 시험관에 넣은 배지에서 시험한다.
시료 원액 또는 희석시료액 10ml, 1ml, 0.1ml를 각각 5개의 액체배지 10ml 발효관에 접종한다. 다만 시료액 10ml를 접종할 때에는 2배농도의 lactose broth배지 10ml를 사용하고 시료액 0.1ml이하인 경우에는 10배수 희석 시료액 1ml씩을 접종하도록 한다. 배양을 35~37℃에서 24시간 하고 액체배지에서 유당을 발효하여 gas발생 유무를 조사하여 양성이면 추정 시험 양성으로서 다음의 확정시험으로 옮기고 음성이면 24시간 더 배양하여 gas 발생의 유무를 확인한다.
②확정시험
추정시험 양성의 발효관으로부터 BGLB 발효관에 이식하여 35~37℃에서 24±2시간 또는 48±3시간 배양하여 gas 발생한 BGLB발효관으로부터 1백금이를 EMB agar 또는 Endo agar평판 배지에 도말 배양하여 배양 후 녹색 금속성 광택의 전형적인 댿�장균군의 colony가 형성되면 시험 양성이다.
③완전시험
확정시험에 평판배지 위에 생긴 전형적인 댿�장균군의 한 개 또는 그 이상의 colony로부터 균을 타서 각각 lactose broth 발효관 및 nutrient agar 사면배지에 이식한다. Lactose broth발효관에서 35~37℃, 48±3시간 이내에 gas 가 발생한 것은 nutrient agar 사면배지의 colony에 대해서 Gram 염색, 포자 염색을 하여 Gram 음성, 무포자의 간균이 증명되면 완전 시험 양성이며 대장균 군 양성으로 판정한다.