멸균법 종류, 액체 배지 제조 및 배양

1. 멸균 : 실험실에서 미생물을 동정하고 생화학적 검사를 하기 위한 세균의 배양은 필수적이다. 미생물은 다양한 종류의 배지에 접종되거나 이식되어 증식하게 된다. 그러나 미생물을 접종하거나 이식할 때 원하 지 않은 미생물이 증식 할 수 있으며, 이것을 오염(contamination)이라 한다. 이러한 오염을 방지하기 위하여 모든 배지왿� 기구 등은 사용 전 에 철저히 멸균 처리되어야 한다.
멸균(sterilization)이란 아포를 포함한 모든 미생물을 죽이거나 제거하 는 것을 말한다. 멸균 방법은 크게 열, 자외선, 방사선, 고주파 등을 이 용하는 물리적 방법과 약액 또는 가스를 이용하는 화학적 방법이 있다. 한편 소독(Disinfection)이란 특정한 미생물, 즉 병원성이 있는 미생물 을 죽이는 것을 말한다.
1) 화염 멸균법 (flame sterilization, 소각 포함) : 멸균하고자 하 는 물체를 불꽃에 직접 접촉시켜 피멸균품의 표면에 붙어있는 미생물을 태워서 멸균시키는 방법으로, 가장 확실하고 신속한 멸균 방법이다. 세 균 검사에 사용하는 백금선, 백금이 또는 시험관 입구를 멸균하는 데 쓰인다. 가스버너나 알코올램프의 불꽃 가운데서 가열 멸균한다. 백금이 나 백금선의 멸균법은 우선 니크롬선 부분을 환원염으로 가열 시킨 후 산화염에서 붉은 색을 띨 때까지 가열한다. 백금이는 bacti-incinerator 를 이용하여 화염 멸균 할 수도 있다.
2) 건열 멸균법 (Dry Heat Sterilization) : 유리제품(피펫, 페트리 디시, 시험관, 삼각 플라스크, 메스실린더), 금속(약수저), 도자기 제품 등의 기구류를 멸균하는 데 알맞은 방법으로 건열멸균기 안에서 160~180℃로 2시간30분~3시간 가열한다.
3) 고압증기 멸균법 (Autoclaving) : 고온의 포화 수증기로 멸균하 는 방법으로 통상 121℃, 1.5기압, 15~20분간 처리한다. 많은 기구왿� 배지의 멸균에 가장 알맞은 방법으로, 배지왿� 시액의 멸균은 대부분 이 방법으로 하며, 일반적으로 멸균 온도, 시간 및 배기판이 자동적으로 조 절되는 고압 증기 멸균기를 사용한다. 멸균이 끝난 후에 반드시 멸균기 내 압력 이 제로로 떨어졌는가를 확인하여야 화상 등의 사고를 방지할 수 있다.
처리시간은 내용물의 종류나 양에 따라 적절히 변화시켜 주어야 한다, 예를 들면 수십~수백 ㎖ 정도의 배지는 15분이면 충분하나 수 ℓ의 배 지는 15분으로는 충분히 내부까지 열이 전달될 수 없으므로 30분 이상 의 처리 시간이 필요하다.
종이마개 또는 솜마개를 한 용기는 멸균 시 수증기에 의해 마개가 젖 으면 잡균이 부착되기 쉬우므로 유산지 또는 알루미늄 호일 등으로 마 개 부분을 싸서 넣는다.