유전체 제한효소 (restriction enzyme) 지도 작성 (mapping) 실험 리포트

1. 실험목적
Plasmid DNA를 restriction enzyme(제한효소)로 처리하여 restriction enzyme의 특성과 plasmid의 특성을 이해한다. Agarose gel 전기영동의 원리를 이해하고, 크기왿� 모양에 따른 DNA의 위치를 통하여 제한효소 지도를 작성한다.
2. 원리 및 이론
1) Restriction enzyme의 기능
제한효소는 DNA 사슬 상의 특정한 염기배열을 인식한 후, DNA의 두 사슬을 모두 절단하는 endonuclease인데 인식하고 절단하는 염기배열에 따라 세 종류(I, II, III)는 특정 염기배열(일반적으로 4~6개의 염기쌍으로 구성됨)을 인식하고 인식한 염기서열 내의 특정 부위를 절단하고 그 결과로 3’ 끝이나 5’게 사용되고 있다.
예를 들어 EcoRI의 경우, 5’-GAATTC-3’의 서열을 인지하고 절단하여 5’ 끝이 밖으로 나온 sticky 형태의 DNA를 만들게 된다. PvuII의 경우, 5’-CAGCTG-3’의 염기서열을 인지하고 절단하여 끝이 무딘



6. Discussion
pUC19의 사이즈는 2,686bp이고 PvuII 제한효소 자리는 플라스미드 내에 baI, EcoRI 제한효소 자리는 한 군데씩 존재한다(표 5.). 제한효소 자리가 한 군데만 있는 제한효소로 반응시키면 2,686bp의 linear한 DNA 산물이 생성되고, 제한효소 자리가 두 곳이 있는 PvuII의 경우에는 322bp, 2,364bp의 두 개의 DNA 산물이 생성되어야 한다. 제한효소를 첨가하지 않은 대조군의 경우 2,868bp 크기의 환형의 supercoiled DNA이므로, 같은 크기의 선형 DNA인 BamHI 반응산물보다 더 많이 migration 된 것을 볼 수 있었다(그림 7-①). 한 군데의 제한효소 자리를 갖는 BamHI으로 잘려진 DNA는 선형이므로 대조군보다 덜 이동된 위치에 하나의 밴드가 나타났다(그림 7-②). PvuII의 제한효소 자리는 두 곳이 존재하므로 제한효소 반응 후 322bp왿� 2,364bp 두 개의 DNA 산물이 생성되어야