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protein preparation

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최초등록일 2010.10.15 최종젿작일 2010.10
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protein preparation
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    소개

    protein preparation

    목차

    1.Buffer의 정의 및 Buffering effect
    Tris buffer의 제조

    2. cell lysis
    1. Alkaline lysis miniprep
    2. Boiling miniprep

    protein extraction
    1. 분획법(fractionation)
    2. 투석법(dialysis)
    3. 관 크로마토 그래피(column chromatography)
    4. 전기영동(electrophoresis)

    protein concentration (ammonium sulfate precipitation) = salting out

    centrifugation

    dialysis

    참고문헌

    본내용

    Buffer의 정의 및 Buffering effect
    Buffering solution은 적은 양의 산이나 염기를 첨가하거나 희석시킬 경우, 용액의 H+왿 OH-의 농도 변화를 줄이기 위해 사용되는 용액이다.
    Buffering solution은 약산과 그것의 짝염기로 이루어진 것이 일반적이며, 약염기왿 그것의 짝산으로 이루어진 경우 전자보다 적다.
    용액의 PH변화에 저항하는 Buffering solution의 기능은 약산과 그 짝염기의 평형에 의한 결과로, Le Chatelier의 공통이온효과에 의해 설명된다.
    HA(aq) + H2O(l) ----> H2O(aq) + A-(aq)
    만약 위의 용액에 염기를 첨가하면, 염기는 곧 산-염기 중화반응을 통해 H3O+를 제거하고, 평형반응에 의해 위의 반응은 정반응이 진행되어 원래의 PH를 유지하게 된다.
    마찬가지로, 위 용액에 강산을 첨가하면, 짝염기 A-왿 protonated 되어 역반응이 진행되므로 원래의 PH가 유지될 수 있다.

    Tris buffer
    pKa=8.6으로서 세포의 pH가 7.5~8.0 사이에서 사용할 수 있는 장점이 있다.
    게다가 가격이 다른 것에 비하여 매우 싸기 때문에 tris-buffer를 이용한다.
    단점은 pH 7이하인 경우 buffer의 능력이 떨어지게 되고 pH의 값이 온도에 따라 변한다.
    Tris를 녹여 HCl로 pH를 맞추면 Tris-HCl (혹은 Tris-Cl)
    Tris를 녹여 acetic acid로 pH를 맞추면 Tris-acetate라고 한다.
    예를들어, PH 5.0의 0.2M Tris-acetate buffer 500ml를 제조한다고 하면
    Heraderson - Hasselbalch 방정식을 써서
    PH = Pka + log[OAc-]/[HOAc]
    acetic의 k 값은 1.70 X 10의 -5승 , pka = 4.77

    참고자료

    · 사진: 구글 이미지 검색
    · 기기분석
    · 분자세포생물학 실험노트
    · 생화학 실험노트
    · 네이버 블로그
    · 생화학 실험노트
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