Western Blot

목졵: 우리는 여러 가지 단백질이 섞인 sample에서 개개의 단백질 성분, 특히 AP를 분리해 보기 위해서 SDS-PAGE를 실시하였다. 그러나 marker로 인해 AP의 알려진 분자량으로 AP가 어디에 있을 것이다라는 것을 추측할 수 있지만, 그것이 AP인지 확신할 수 없었고 AP라는 특정 단백질을 순수하게 검출할 수 없었다. 따라서 주어진 sample에서 AP의 유무를 확인하고 검출해내기 위해 western blot(Immunoblotting)이라는 실험을 수행하게 되었다.
이 실험기술은 전기영동을 한 polyacrylamide gel로부터 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 항체(antibody)를 이용하여 특정 단백질을 검출하는 방법이다. 이 실험으로부터 항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질(AP)을 분석하는 western blot의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 gel로부터 membrane으로의 transter, 항체반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험기법을 습득한다.

원��(Principles)
Western blot과 면역염색법(immunostaining)은 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정단백질을 찾아내는 기법으로서 찾고자 하는 단백질에 대한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정단백질의 존재여부를 밝혀내는 실험기법이다. DNA를 검출할 수 있는 southern blot, RNA를 검출하는 northern blot, 단백질을 검출하는 western blot은 분자생물학의 중요한 3대 요소를 검출하는 가장 기본적이고 중요한 기술이라 할 수 있다. 여러 단백질을 SDS, urea 또는 2-mercaptoethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후 SDS-polyacrylamide gel 전기영동한 후 Coomassie brilliant blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 띠(band)를 확인하고 nitrocellulose 또는 nylon membrane에 옮긴다.(단백질을 옮기는 이 과정을 western blot 또는 western transfer라고 한다)