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예비.Determination molecular weight of protein and separation by electrophoresis (SDS-PAGE)

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최초등록일 2013.05.09 최종젿작일 2011.10
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예비.Determination molecular weight of protein and separation by electrophoresis (SDS-PAGE)
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    목차

    1. 실험제목
    2. 실험목적
    3. 실험원리
    4. 참고문헌

    본내용

    1. 실험제목
    Determination molecular weight of protein and separation by electrophoresis (SDS-PAGE)

    2. 실험목적
    electrophoresis에 의한 단백질의 이동 원리왿 크기에 따른 분리 과정을 이해한다.

    3. 실험원리
    1) SDS-PAGE의 원리
    보통 SDS-PAGE는 두가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 Disc(discontinuous pH 또는 disc) gel 전기영동으로 시행하게 된다. 이를 사용하면 단백질 시료가 gel에 apply되었을 때 모든 시료가 같은 점에서 출발할 수 있도록 압축이 되고, 그다음에 성질에 따라 분리되게 된다. 따라서 두 gel의 농도나 pH가 다르게 설정되어 있다.
    윗부분의 gel은 stacking gel이라 부르며, acrylamide 농도는 주로 3~5%이고 pH는 running gel보다 2 정도 낮은 6.5를 주로 쓰게된다. 아래의 gel은 running gel, resolving gel, separating gel 등으로 불리며, acrylamide 농도는 분리하고자 하는 단백질의 크기에 따라 6~15%를 주로 사용한다.
    Gel의 윗부분 완충용액(upper chamber buffer)의 glycine은 아미노산의 성질로 인해 음전하를 띠거나 net charge가 0인 zwitter이온 형태로 존재한다. Gel에 형성된 well에 단백질 시료를 가하고 전기영동을 시작하면 Cl-이온과 단백질, glycine-이온이 모두 +극을 향해 출발하게 된다(Zwitter이온은 움직이지 않는다). 그런데 Glycine-은 stacking gel의 낮은 pH에서 다시 평형을 이루어 일부가 zwitter이온이 되어버리기 때문에 이 부분에서 움직이는 이온(mobile ion)이 없어지고, 결과적으로 전류가 감소하게 된다. 그러나 전체 gel 시스템의 전류는 유지되어야 하므로 이를 극복하기 위해 Cl-이온과 glycine-이온 사이에 매우 높은 전압차가 형성된다.

    참고자료

    · 생명과학대사전, 강영희, 아카데미서적, 2008.
    · 분자 생물학 실험서, 김영희, 월드사이언스, 2008.
    · http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/protein_purify_ep.php (연세대학껓 의과대학 생화학-분자생물학껓실)
    · http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm (유전단백체 기능제어 연구 비바카지노 Viva)
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