Early development of Xenopus Laevis emvryo

1. 암컷 xenopus의 뒷다리 사이에 손을 끼워서 힘으로 제압한 다음 한 쪽 손으로 다리를 벌려주고 cloaca부위에서 알을 짜낸다. (전날 밤 HCG호르몬 주사) 체내에서 나온 알의 안정된 상태를 유지시키기 위해서 1 X MBS buffer를 미리 petri dish에 부어놓는다.
2. Petri dish에 담긴 buffer을 스포이드를 이용하여 버려주고 0.1 X MBS buffer를 부어 washing 해준다. 오전 시간에 해부하여 얻은 정소를 이용, 잘게 썰어서 정자 solution을 만든다. 이것을 난자 위에 뿌려주고 수정을 기다린다. (20mins)
3. Cysteine solution (4.5% cysteine in 0.1 X steinberg`s solution, pH7)에 담궈서 jelly층이 완전히 제거되기를 기다린다. 이 때, Shaker를 3~4분 정도 돌려둔다. (외막들이 제거됨)
4. 가운데 모이면 cysteine solution을 버려준다.
5. 0.5 X MBS에 ficoll powder를 2%정도 녹여서 안에 있는 내막이 덜 벗겨지도록 수정된 cell에 부어준다.
6. 시간에 따라 변하는 egg cell을 현미경으로 관찰한다.

<중 략>

<스트레스 주름>
Xenopus알의 첫 번째 난할에서 분열홈이 동물반구왿� 식물반구에서 차이가 나는 것을 알 수 있다. 첫 번째 분열홈이 식물반구의 난황이 많은 세포질에서 계속 진행함에도 불구하고 두 번째 분열은 이미 동물극에서 시작된다. 첫 번째왿� 두 번째 난할은 경할로 서로에 대해 수직으로 일어난다. 세 번째 분열은 예정대로 수평으로 일어나지만 식물극에 위치한 난황 때문에 분열면은 적도면이 아니라 동물극으로 치우친다. 이러한 분 반구의 밀도 차이 때문에 동물극과 식물극 사이의 홈에 스트레스 주름이 생긴다.

<불규칙 난할>
이 실험에서 불규칙 난할을 하는 배가 관찰되었다. 양서류의 알은 비교적 규칙적인 불균등 난할을 하므로 이 배의 불규칙 난할은 다수정의 결과로 보인다.