Exp 2, 3 Transformation & QIA prep Spin Miniprep kit using a Microcentrifuge

1. 실험목적
Exp 2. Transformation
Competent Cell에 Sample을 Transformation을 시켜서, LB Plate에 배양 시켜 그 결과를 얻는 데 있다.

Exp 3. QIA prep Spin Miniprep kit using a Microcentrifuge
Transformation 한 Sample을 다시 Miniprep으로 추출해서, 전기영동으로 그 결과 양상을 확인하는데, 있다.

2. 실험재료 및 도구
Exp 2. Transformation
DH5α, LB Plate(0.005% ampicilin), LB Medium(0.005% ampicilin), SOC Medium, 항온수조, puc19, Plasmid DNA(항생제 저항성), Plasmid Vector
Culture 용 Tube, Shaking incubator(진탕배양기), Micro pipette, Ice, Spreader, E-tube

<중 략>

5. p 1 buffer를 넣고, micro pipet으로 조심스레 녹였다.

6. p 2 buffer를 넣고, 5분 뒤에 4-6회 뒤집었다.

7. N3 buffer를 넣고, 바로 4-6회 뒤집기를 반복했다.

8. 원심분리기로 10분 정도 원심분리를 시켰다.

9. 원심분리가 끝난 Sample을 Spin Colum으로 부어서, 옮겨 담고, 원심분리를 1분간 시켰다.

10. 하층액을 제거하고, 0.5㎖의 PB buffer를 컬럼에 넣고, 1분간 원심 분리시키고 하층액을 제거 했다.

11. 마찬가지로 0.75㎖의 PE buffer를 넣고, 1분간 원심분리를 하고, 하층액을 버렸다.

12. 아무것도 첨가하지 않은 채로 1분간 원심분리를 시켰다.

13. E-tube에 Label 하고, 50㎕ EB buffer를 컬럼에 넣고, 1분 기다렸다. 1분간 원심 분리 했다.