생화학 실험 보고서 5,6,7주차 - 이온교환 Chromatography에 의한 달걀흰자 Lysozyme 분리, Enzyme Activity 측정, 단백질 정량

실험 1. 이온교환 Chromatography에 의한 달걀흰자 Lysozyme 분리
2013년 11월 7일 목요일

가) 실험이론과 원칙
(1) 실험 목적
수많은 종류의 단백질 중에서 이들의 아미노산 조성이나 배열을 결정하고 성질을 규명하기 위해서는 먼저 단백질을 추출해 내야 한다. 이온교환 Chromatography를 비롯한 여러 정제법에 의해 순수한 단백질을 얻는 것은 단백질 연구의 가장 기본이며 필수적인 과정이다.

(2)단백질 분리의 원리왿� 주의할 점
대부분의 단백질은 40℃ 이상의 열이나 유기 용매, 혹은 진한 산이나 염기에 의해 변성이 되므로 이러한 조건에 단백질이 놓이지 않도록 해야 한다. 실온에서 오랜 시간 방치하거나 말리는 일도 피해야한다. 단백질 용액은 미생물이 자랄 수 있는 좋은 환경이고, 또한 미생물이 분비한 단백질 소화효소에 의해 분리해 놓은 단백질이 파괴되는 경우가 흔히 있으므로 실험에 청결한 기구를 사용함은 물론이고 단백질 용액을 항상 차게(0~4℃) 유지하고, 밤새 혹은 그 이상 보존하고자 할 때는 toluene등 미생물 생장 억제 물질을 한 두 방울 가해 섞어 주는 것이 좋다.
어떤 단백질이거나 한 단계의 분리 방법을 통해 순수하게 분리되는 경우는 드물다. 대개는 서로 다른 원리의 몇 가지 과정을 통해서야 비로소 순수 분리가 된다. 또한 각 단백질마다 자신의 독특한 성질을 가지고 있으므로 이에 따라 적당한 분리법을 선택하여 사용하여야 한다. 단백질의 분리에는 주로 염이나 유기용매에 의한 가역적 침전, 이온교환 Chromatography, Sephadex 젤 여과법이 많이 이용되며, 그 외 필요에 따라 Affinity chromatography, electrophoresis 등을 이용한다. 단백질을 분자량이 작은 염 이온이나 유기분자들과 분리하기 위해서는 투석이나 Sephadex G-25 젤 여과를 통하는 것이 보통이다.
단백질을 분리해 나가는 과정 중에 원하는 단백질이 얼마나 잘 분리 되었는지를 알아보기 위해 각 단