Agarose gel electrophoresis (전기영동)실험- 예비,결��,레포트,보고서

1. 저번 실험에서 증폭된 PCR product를 전기 영동으로 분리하여 분석한다.
2. 전기 영동의 원리를 이해하고 전기 영동 장치 및 Gel 판독기의 사용법을 익힌다.
3. DNA ladder의 band왿� 비교하여 증폭된 PCR product의 크기를 측정한다.

-Agarose gel electrophoresis이란 gel 전기영동법(gel electrophoresis)의 하나로서 정제된 한천 겔(gel)을 지지체로 사용하여 직류 정전압의 전류를 통함으로써 하전된 목적물질을 분리 하는 것을 말한다. 전기영동을 수행하기 위해선 전기적 전하를 가지는 분자를 물에 녹이고, 각각 양극과 음극을 가지는 전극을 용액 안에 놓아야 한다. 이후에 전류를 흐르게 하면, 음전하를 가지는 분자는 양의 전극에 닿을 때까지 용액을 가로 질러서 이동한다. 이때, 양전하를 가지는 분자는 반대방향으로 이동한다. 전하를 가지는 분자는 이온이라고 알려져 있다. 전기적 끌림의 영향으로, 더 강한 전하를 가지는 분자는 더 빠르게 움직인다. 또한, 크기가 더 큰 분자를 움직이기 위해서는 더 큰 힘을 필요로 한다. 각 핵산 분자는 하나의 뉴클레오티드 당 1개의 음전하를 가지고 있기 때문에, 이들 두 요인은 상쇄된다. 결��적으로, DNA나 RNA의 모든 분자는 용액 상에서 같은 속도로 양극으로 이동한다. 만약에 우리가 DNA나 RNA를 크기에 따라서 분리하고자 한다면, 우리는 큰 분자의 속도를 늦추기 위해서 어려움을 주어야 한다. gel은 교차 결합된 폴리머 사슬의 그물망으로, 핵산을 분리하기 위해서는 보통 한천을 사용한다. DNA분자는 gel의 그물망 사이를 통과하기 위해서 gel 사이를 이동하는 동안 그 이동 속도가 감소된다. 더 큰 분자는 gel에 있는 구멍을 통과하기 어렵다. DNA 분자가 gel matrix 사이를 통과할 때, 분자량이 커질수록, gel matrix가 치밀할수록 그 속도가 느려지기 때문이다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoil된 DNA는 Linear DNA 보다 빠르게 움직인다. 보통 0.5~2.0% 농도의 아가로오스를 사용한다.