gel extraction(겔추출)실험 - 예비,결��,레포트,보고서

Gel Extraction이란?
DNA를 전기영동하여 관찰되는 band 중에서 특정한 band를 Gel로부터 유리해내는 기술. 이 방법은 재조합 DNA를 만들 때 대단히 중요하게 쓰이는 기술이므로 보다 회수율이 높고 용출(elution)된 DNA의 순수도가 보다 높고, 또한 보다 빠르고 간편하게 실행할 수 있는 방법이다.
Gel에서 DNA를 회수하는 방법은 다양하다.
-DNA 분리 방법과 그 원리
(1) Low melting temperature agarose method
Agarose 중에서 저온에서도 녹는 agarose를 사용한다.
Agarose를 저온에서 녹여 용액에 녹은 DNA를 분리해내는 방법이다.
다른 방법에 비하여 분리되는 DNA 양이 적지만 제한효소나 ligation에 필요한 효소를 gel에 직접 처리할 수 있다는 장점을 지니고 있다.
(2) Electroelution
전기장을 이용하여 DNA를 분리해내는 방법이다.
주로 Dialysis tubing 방법과 NA-45 membrane 방법을 쓴다.
먼저 Dialysis tubing 방법은 Gel 조각을 tube안에 넣어 전기영동을 시키면 Dialysis tube 안에 DNA가 모이는데 그 방법을 이용한 것이다. 현재까지는 알려진 가장 불편한 방법이지만 5kb보다 큰 DNA 조각들을 분리하는 데에는 가장 효과적인 방법이고 순수도가 높다.
NA-45 membrane 방법은 Gel 조각을 NA-45 membrane에 붙여서 전기장을 주면 Gel에서 빠져 나온 DNA가 NA-45 membrane에 결합하게 되는데 그것을 이용한 것이다. 여러 DNA를 동시에 분리하고 0.5kb~5kb 크기의 분리함에 있어서 효율성이 높은 비교적 간단한 방법이다. Membrane 으로부터 분리되는 DNA는 순도가 높으므로 거의 모든 용도로 사용이 가능하다.
(3) High salt extration
6M 정도의 고농도의 나트륨이온을 사용하여 agarose gel을 녹인 뒤 DNA를 glass에 붙여 분리해내는 방법이다.