서강대학껓 현대생물학씄험2 DNA purification, DNA 정제

Medium은 필요에 따른 세포왿� 생체조직, 미생물들의 배양을 위하여 배양체가 필요로 하는 물질을 넣어준 영양원을 뜻한다. Medium을 구성하는 물질로는 질소원, 탄소원, 무기염류가 있으며 실험목적에 따라 항생제를 첨가하기도 한다. Medium을 분류하는 기준으로는 Medium의 조성, 영양소의 양, 사용 목적과 물리적 성질에 따라 분류한다. 각 분류에 따른 medium의 특성과 예시는 <table 1>과 같다.

table 1. Medium의 특성에 따른 분류 기준, 종류 및 특징

Medium 사용시에는 외부 미생물에 의한 오염을 막기 위하여 모든 형태의 생명체를 제거하는 Sterilization의 과정을 거쳐야 한다. 실험에서 사용되는 Medium은 미생물들이 생장하기에 매우 좋은 환경이 조성되어있기 때문에 미량의 미생물이라 할지라도 Medium에 유입되는 경우 오염되어 실험결과에 영향을 미칠 수 있기 때문에 sterilization은 필수적인 과정이다. Sterilization은 그 방식에 따라 Heat(열처리), Filtration(여과), Chemical(약품처리), Radiation(방사능)으로 나뉘며 이번 실험에서는 Heat 방식 중 Autoclave를 채택하였다. Autoclave는 대상을 고압을 견딜 수 있는 밀폐 가능한 철제 멸균기에 넣어 일반적으로 121℃, 15psi 조건에서 15~20분간 멸균하는 방법이다. 이는 열에 약하지 않은 시료에 사용해야 한다.
형질전환(transformation)은 외부의 DNA가 박테리아의 내부로 삽입되어 발현됨으로 박테리아의 형질을 바꾸는 현상으로 1928년 Frederick Griffith의 실험 결과로 무독성의 폐렴쌍구균과 열처리된 독성을 띄는 폐렴쌍구균을 함께 섞어주면 무독성의 폐렴구균이 독성을 갖게 되는 현상을 관찰하였고, 이후 1944년에 Avery등에 의해 외부의 DNA가 박테리아 내부로 유입되어 형질전환이 일어난다는 사실을 밝혔다.