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학점4.5/학과수석/실험강좌수석/보고서만점-Enzyme kinetic assay:Horseradish peroxide 예비 및 결과보고서/ 효소반응속도론

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최초등록일 2020.03.31 최종젿작일 2019.03
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학점4.5/학과수석/실험강좌수석/보고서만점-Enzyme kinetic assay:Horseradish peroxide 예비 및 결과보고서/ 효소반응속도론
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    소개

    작정자는 1년간 학점 4.5(A+), 학과수석, 실험강좌 수석, 보고서 만점을 받았으며
    본 보고서는 horseradish peroxide를 활용해 enzyme kinetic assay를 알아보는 실험 보고서입니다.

    목차

    1. Enzyme kinetic assay: Horseradish Peroxidase 예비 보고서
    1) 실험목적
    2) 실험이론 및 원리
    3) 실험기구 및 시약
    4) 실험방법

    2. Enzyme kinetic assay: Horseradish Peroxidase
    1) 실험결과
    2) 고찰
    3) 참고문헌

    본내용

    Ⅰ. 실험 결과
    ▶실험 결과 분석 개요
    ABTS 농도별로 시간에 따른 흡광도 변화를 그래프로 그린다. 이후 이 그래프를 통해 초기 속도 Vo를 구한다. 이 때 구한 초기 속도Vo왿 기질 농도[ABTS]간의 그래프를 그린 후 직선이 되는지 확인한다. 초기 속도는 두 가지 방법으로 구한다. ①시간-흡광도 그래프의 추세선을 미분하여 t=0일 때의 값을 구한다. ② 초기 시간 값 두 개를 직선으로 연결하여 기울기를 구한다.
    이 두 가지 방법으로 구한 Vo값을 이용하여 Lineweaver-burk plot을 통해 Vmax왿 Km 값을 구한다. Lineweaver-burk plot에서 x절편이 -1/Km이며 y절편은1/Vmax이다. Lineweaver-burk plot을 통해 구한 Vmax왿 Km을 이용하여 Kcat값을 구한다.

    <중 략>

    Horseradish peroxidase (HRP) 10㎍/㎖ 100㎕왿 기질인 ABTS 2㎍/㎖ 300㎕를 사용하여 용액을 생성하였다. 전체 총 부피가 1ml로 HRP의 기존 부피의 10배가 되었으므로 농도는 1/10로 감소, 따라서 효소 농도=[HRP]=1㎍/㎖이다. HRP의 분자량은 약 44000g/mole 이므로 μM 농도로 환산하면 0.0227μM 이 된다. 마찬가지로 기질 부피의 10/3배 이므로 ABTS 기질의 농도는 15μM, 30μM, 60μM, 90μM, 120μM이다. (그러나 편의를 위하여 계산을 제외한 그래프에는 희석 전 ABTS 농도로 기입하였다.) 실험 결과를 토대로 lineweaver-burk plot을 그려보면 다음과 같다.

    참고자료

    · 강치욱, “생물학총론” 2019, p58
    · 생명과학대사전, 초판 2008, 개정판 2014, 강영희
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