PCR

1. Abstract

이번 실험은 DNA 중합 효소를 이용하여 특정 염기 서열을 대량으로 증폭시키는 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 하였다. PCR mixture를 만든 후 PCR Thermocycler에 의해 각 과정 별로 정해진 온도로 가열을 해주어 PCR을 진행하였다. 증폭시킨 DNA를 Agarose gel 전기영동을 통해 확인한다.

2. Experiment

 시약 및 장치
- PCR Machine, Micropipette (10, 20, 100), PCR tube, Plasmid DNA, Nuclease free water, Forward primer, Reverse primer, pfu polymerase
- Electrophoresis agarose, 1kbp DNA ladder, 6X Loading star, UV transilluminator

 실험 방법
① Table 1의 구성으로 PCR mixture를 만든다. 시약은 위에서부터 순서대로 넣어준다.
 DNA template는 지난 실험에서 분리한 Plasmid DNA로 스스로 복제가 가능하다.
 순서대로 넣어 주어야 하는 이유는 Thermocycler에서 반응시키기 전에 반응이 일어나는 것을 막기 위함이다.
② PCR Thermocycler의 온도를 설정하여 PCR을 진행한다.
 PCR thermocycler setting : 94℃ 3min, [94℃ 30sec(Denaturation), 52℃ 30sec (Annealing), 72℃ 1min (Polymerization)]X 11 cycle, 72℃ 5min
③ 전기영동 기기에 Agarose gel을 넣고 1X TAE buffer를 잠길 때까지 채운다.
 TAE buffer는 Tris(양이온을 공급해 –를 띄는 DNA를 끌고감), Acetate(pH를 낮추어 완충역할), EDTA(전기 영동하는 동안 DNA 분해되는 것 막음) 이렇게 3가지 물질이 들어있다.