Miniprep A+ 실험레포트(결��, 이론)

1. Abstract
이번 실험은 유전자 재조합 기술에서 널리 활용되며 세균의 세포 내에 복제되어 독자적으로 증식할 수 있는 염색체를 제외한 원형의 DNA분자인 플라스미드 DNA를 Miniprep의 여러 방법 중에서 Alkaline Lysis법을 이용하여 대장균 E.coli 세포로부터 추출하고 추출한 Plasmid DNA의 크기를 전기영동을 이용하여 측정하는 실험이었다. 선택적으로 Plasmid DNA만을 세포로부터 분리시키기 위해서 Miniprep kit를 이용하였고 이는 세포벽을 파괴하는 역할을 하는 S1 buffer, 세포막을 파괴하고 DNA를 변성시키는 역할을 하는 S2 buffer, 단백질 변성의 정도의 차이를 이용하여 원형의 플라스미드 DNA만을 원형회복 시키고 변성된 단백질이나 핵산이 원형회복 하는 것을 억제하고 응집시키는 역할을 하는 S3 buffer, 남아있는 염들을 씻어내고 Plasmid DNA 순도를 높여주는 역할을 하는 PW buffer, 사용한 Column의 Membrane에 붙어 있는 Plasmid DNA를 녹여내는 역할을 하는 EB buffer로 구성되어 있다. 실험이 끝난 후 조교님들이 전기영동을 이용한 결��값을 보내주신 것으로 실험을 통해 추출해낸 Plamid DNA의 분자의 크기를 확인할 수 있었다. 확인 결�� 약 4.0~5.0kbp 크기인 것을 확인할 수 있었다. 이번 실험에서 추출한 본래의 Plasmid 크기 5.493kbp에 0.8kbp(eGFP)왿� 1.7kbp(another gene)의 합인 7.993kbp에 비하면 약 1/2 크기의 수준인데 이는 Plasmid DNA의 Super coiled 구조로 인한 결��로 해석할 수 있다.

2. Experiment
※ 실험 시약 및 장치
● Spin column
: Glass Micro Fiber Filter에 DNA가 흡착하는 것을 이용하여, 대장균으로부터 Plasmid DNA를 추출할 때 사용한다.