결과4_Transformation A+ 결��레포트

1. Abstract

유전자 재조합 법에서 다른 세포로 전달하는 과정에는 3가지(형질전환(Transformation), 형질도입(Transduction), 접합(conjugation))가 있다. 그 중 이번 실험은 재조합된 DNA(eGFP)를 competent cell에 넣고 생성된 colony를 관찰하는 Transformation 실험이었다. 이론상 대조군은 DNA를 넣지않아 ampicillin에 대항하는 유전자가 없어서 세균이 배양되지 않지만 eGFP(녹색형광단백질)을 포함한 재조합된 DNA를 넣어준 competent cell은 ampicillin에 대항하여 세균이 배양되어 colony가 육안대로 나타나야한다. 이러한 이론과 실험결과가 부합하는지 살펴보고 이론과 실험결과가 부합하지 않았을 때 이러한 결과가 생긴 원인을 고찰해보았다.

2. Experiment

(1) 아래 Table 1의 조성으로 LB고체배지를 만든 후 Autoclave로 멸균한다.

주의 사항 : Autoclave는 고온, 고압에서 다루므로 주의하여 사용해야한다. 마친 후 압력이 떨어지기 전까지 뚜껑을 열지 않아야하고 Autoclave를 사용하여 멸균할 액체는 액체의 부피보다 큰 용기를 사용하여 멸균해야한다. 또한 Autoclave 중 액체가 넘쳐 흘렀다면 반드시 내부를 꼭 세척해야한다. Auto의 수증기 발생을 위한 물은 꼭 증류수를 사용하도록 한다.

100ml 기준
Tryptone
1g
Yeast Extract
0.5g
NaCl
1g
Agarose
1.5g
Table 1. LB고체배지 조성

(2) 60℃ 이하의 온도에서 Ampicillin (1000×)을 넣고 2개의 Petridish에 20ml씩 넣고 식힌다.

주의 사항 : Ampicillin은 온도에 민감한 물질이다. 따라서 60℃ 이하에서 실험을 진행해야한다. 온도가 너무 높으면 Ampicillin이 변성되어 활성이 떨어지고, 너무 낮으면 Plate를 제조할 때 배지가 굳을 가능성이 있기 때문에 적당한 온도인 60℃에서 실험을 진행해야한다.