결과3_Restriction of DNA A+ 결��레포트

1. Abstract

이번 실험은 실험을 위해 사용할 Plasmid DNA를 제한효소를 이용하여 절단한 후 전기영동을 통해 절단된 DNA의 크기를 분석해보는 실험이었다. 제한 효소로는 XhoI, NdeI, EcoRI 3가지가 DNA를 절단하기 위해 사용되었다. 3가지 제한효소는 모두 Sticky end를 가진다.
이론적으로 볼 때 1가지 제한효소를 넣은 1,2,3조에서는 8kbp에 가까운 값이 나왿�야하며 2가지 제한 효소를 넣은 4조에서는 EcoR I & Xho I를 넣었으므로 1.7kbp, 6.3(5.5+0.8)kbp 5조는 Eco R I & Nde I를 넣었으므로 0.8kbp, 7.2(1.7+5.5)kbp 6조의 경우에는 Xho I & Nde I를 넣었으므로 5.5kbp, 2.5(0.8+1.7)kbp의 결과가 나왿�야한다. 마지막으로 3가지 제한 효소를 넣은 DNA는 0.8kbp 크기에 해당되는 eGFP, 1.7kbp 크기에 해당되는 another gene, 5.5kbp 크기에 해당되는 vector 이렇게 3개로 분리되어야한다. 하지만 잘 된 실험도 있었지만 이런 이론적 결과왿�는 다른 값을 보이는 실험도 있었는데 이에 대한 이유를 고찰해보았다.

2. Experiment

(1) 아래의 레시피대로 반응용액을 만들었다. 완성된 반응용액 부피가 아주 미량이기 때문에 벽에 맺힌 용액들이 있어 피펫팅과 함께 미니 원심분리기를 이용하여 잘 섞어 주었다. 또한 우리 조는 제한 효소를 Xho I 한 가지만 넣었기 때문에 전체 20μl을 맞춰 주기 위해 DDW를 9μl 넣었주었다.

주의 사항 : 이 때 시약은 아래의 표에 나왿� 있는 순서대로 차례로 넣었으며 아주 미량이기 때문에 피펫팅에 유의하여야 한다. 또한 이번 실험은 특히 제한 효소를 넣을 때 피펫을 최대한 계면에서 진행했다. 그 이유는 이번 실험에서는 tube에 제한 효소가 묻어있게 되면 큰 오차를 발생시킬 수도 있기 때문이다. 이것을 방지하기 위해 미니 원심분리기를 이용하여 오차를 줄여주었다.