결과5_Liquid_culture A+ 결��레포트

1. Abstract

이번 실험은 eGFP DNA를 포함하고 있는 유전자가 포함된 세포를 액체 배지에 배양하고 IPTG를 첨가하여 특정 유전자를 발현시켜 그것을 확인해보는 실험이었다. eGFP DNA를 포함한 배지를 shaking incubator에서 37℃로 배양한 후 세포의 수가 급격하게 증가하는 시기인 대수기에 IPTG를 넣어주었고 이 때의 O.D값이 0.6~0.8이다. IPTG를 넣어준 후에 세포 성장에 최적화된 온도인 25℃에서 shaking incubator에서 induction 해주었다. 그 후에 UV transilluminator를 이용하여 대조군(eGFP를 포함x)과 비교해보았을 때 모든 조에서 각각 eGFP DNA를 포함하고 있기 때문에 녹색 형광빛을 나타냈음을 확인하였다.

2. Experiment

(1) 아래 Table 1의 조성으로 LB배지를 2개를 만든 후 Autoclave로 멸균한다.

주의 사항 : Autoclave는 고온, 고압에서 다루므로 주의하여 사용해야한다. 마친 후 압력이 떨어지기 전까지 뚜껑을 열지 않아야하고 Autoclave를 사용하여 멸균할 액체는 액체의 부피보다 큰 용기를 사용하여 멸균해야한다. 또한 Autoclave 중 액체가 넘쳐 흘렀다면 반드시 내부를 꼭 세척해야한다. Auto의 수증기 발생을 위한 물은 꼭 증류수를 사용하도록 한다.

100ml 기준
Tryptone
1g
Yeast Extract
0.5g
NaCl
1g
Table 1. LB배지 조성

(2) Clean-bench에서 60℃ 이하의 온도에서 Ampicillin (1000×)을 각각 50μl씩 넣는다.

주의 사항 : Ampicillin은 온도에 민감한 β-Lactam 고리를 가지고 있어 온도에 민감한 물질이다. 따라서 60℃ 이하에서 실험을 진행해야한다. 온도가 너무 높으면 Ampicillin이 변성되어 활성이 떨어지고, 너무 낮으면 Plate를 제조할 때 배지가 굳을 가능성이 있기 때문에 적당한 온도인 60℃에서 실험을 진행해야한다.℃