[A0, 최종레포트] 화공생명공학기초실험1 - HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

1.Title: HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

2.Purpose
- HPLC의 이론 및 기기조작을 통하여 혼합 액상의 성분을 분석한다.
- 크로마토그래피의 원리왿� 물질의 몰흡광계수를 통해 시료의 정량, 정성 분석 방법을 익힌다

3.Theory
가. HPLC
크로마토그래피는 혼합물의 성분물질을 이동상(mobile phase)과 고정상(column)을 이용하여 분리하는 방법이며 여러 특성을 사용하여 다양한 종류의 방식이 존재한다. 그 중 액체크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography)는 이동상으로 액체를 사용하는 것이 특징이다. 시료의 화학물질이 녹아 있는 이동상을 펌프를 이용하여 고압의 일정한 유속으로 밀어서 충진제가 충진되어 있는 고정상인 컬럼을 통과하도록 하며 이때 시료의 화학물질이 이동상과 고정상에 대한 친화도에 따라 다른 시간대별로 컬럼을 통과하는 원리를 이용하며 이러한 화학물질을 검출기를 이용하여 시간대별 반응의 크기를 측정함으로써 특정 화학 물질을 정량하는 방법이다.

나. 분배계수 K
HPLC는 이동상과 정지상 사이에 용질의 연속적인 분배평형에 의해 분리가 일어난다. 서로 섞이지 않는 정지상과 이동상에 용해된 용질 S의 농도를 각각 CS, Cm이라 하면 분배계수(partition coefficient) K는 그 농도비로 정의된다.

<중 략>

8. Discussion
HPLC는 기본적으로 이동상 저장기, 펌프 장치, 시료 주입 장치, 컬럼, 검출기, 등으로 구성어 있다. 이동상 저장기에는 Acetonitrile이 들어있으며, Benzene, Toluene, Xylene, 미지시료1, 미지시료2 등을 차례로 넣는다. Injection 시 main stream에 영향을 가능한 적에 줘야 하므로 적은 양을 넣어서 정성적으로 주로 분석한다. 컬럼이 nonpolar molecule로 packing 되어 있으므로 이동상 속에 있는 molecule과 packing 된 물질 간의 molecular interaction이 가장 중요하다.