시�����싱 보고서(Sequencing report)

1. Sequencing 개요

DNA의 염기서열을 알아내는 것은 유전공학 연구에 있어서 가장 기본적인 정보를 제공해 주는 중요한 실험이다. 시�����싱은 DNA의 스트레치 내에 뉴클레오티드 염기 (A, C, T, 및 G)의 순서를 결정하는 과정이다. DNA, 또는 게놈의 전체 보완을 Sequencing, 많은 동물, 식물, 미생물 종의 기본 생물학 및 의료 연구를 위한 필수적이다.
DNA 염기서열의 결정은 PCR기술과 더불어 생물정보학에 가장 기초가 되는 기술이다. 최초의 염기서열 결정법은 Maxam-Gilbert 방법이고, 전통적으로 Sanger method에 의한 Sequencing이 주된 방법이었고, 최근에는 Sanger 방법도 기술개선을 통해 한번 반응에 약 900bp 정도의 염기서열을 읽을 수 있게 되었다. 2005년 부터는 신기술에 의해 염기서열 결정에 비약적인 발전을 이루는시데, 이후 개발된 혁신적인 모든 방법들을 Next Generation Sequencing (NGS) 라 한다.

2. Sequencing 정의

DNA염기서열 결정은 유전 질환의 원인 유전자, 또는 관련 유전자의 이상을 직접 증명하는 가장 중요한 단계이다. 전자 이상(돌연변이)을 간단하고 신속하게 검출하는 방법으로 PCR-SSCP가 많이 이용되고는 있지만, 염기의 치환, 삽입, 결손 등의 최종적 확인에는 염기서열 결정이 필수이다.
PCR-DNA 염기서열 결정법에는 직접법과 간접법이 있다. 직접법에는 PCR단편을 그대로 염기서열 결정에 이용하지만, 간접법에서는 그 단편을 플라스미드 벡터로 클로닝한 후 염기서열을 결정한다. 직접법의 이점은, PCR 단편을 직접 염기서열 결정하기 때문에 얻어지는 정보가 주형 DNA의 염기배열을 충실하게 반영한다는 점이다. 이에 비해 간접법에서는 도중에 클로닝 단계가 있기 때문에 Taq polymerase 오독에 의한 2차적인 이상이 아니라는 것을 확인할 필요가 있다.