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소개

"[물��분석실험]Foster resonance energy transfer (FRET)"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 이론 및 원리
가. 실험 요약
나. Fluorescence
다. Time correlated single photon counting (TCSPC)
라. Foster resonance energy transfer (FRET)

2. 실험 방법
가. 실험 과정

3. 실험 결과
가. Emission spectra of buffer and DNA samples
나. Fluorescence lifetimes of donor and acceptor
다. FRET efficiency

4. 토의 사항
가. 실험 고찰
나. Assignments

본��내용

1. 실험 이론 및 원리

가. 실험 요약
본 실험에서는 time-resolved fluorescence spectrometer를 이용하여 Cy3 fluorophore donor왿� Cy5 fluorophore acceptor에 대해 Foster resonance energy transfer (FRET)에 의해 나타나는 fluorophore emission spectra를 측정하였다. 또한, 565㎚에서의 Time correlated single photon counting (TCSPC) 를 이용하여 fluorophore intensity decay curve의 측정을 통해 fluorophore lifetime을 계산하였다. 또한 이를 이용하여 FRET efficiency를 계산하고, 이론적인 계산값과 비교 및 분석하였다.

나. Fluorescence
Fluorescence는 molecule이 에너지를 흡수하여 들든 상태에서 존재하다가 바닥 상태로 내려오며 그 에너지 차이 만큼의 빛을 자발적으로 방출하면서 나타난다. Figure 12에서 나타낸 이러한 과정에는 phosphorescence도 존재하는데, phosphorescence왿�는 달리, fluorescence는 수 ns 이내 에 방출되기 때문에 빠른 시간 내에 일어난다는 점에서 차이가 있다. Fluorescence의 decay 과정에서는 radiative pathway왿� nonradiative pathway가 존재하고, 이 과정에 따라서 emission wavelength가 다르게 나타난다. Fluorescence 측정 방식에는 steady-state measurement, time-resolved measurement가 존재하는데 본 실험에서는 fluorescence가 decay되는 것에 걸리는 시간보다 더 짧은 시간 동안 pulse를 내보내는 방식인 time-resolved measurement를 이용하여 fluorescence decay를 측정하였다.

참고자료

· Monica M., Biotechnology annual review, 2005, 11, 227-252.
· Auston D. H.; et al. Appl. Phys. Lett. 1978, 33, 437-440.
· Becker W.; et al. Microscopy research and technique, 2004, 58-66. Gust A.; et al. Molecules, 2014, 19, 15824-15865.
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