광합성 색소의 분리

1. 실험목적
이번 실험의 목적은 종이 크로마토그래피로 식물의 광합성 색소를 분리하고 각 분획 별 색소의 이화학적 특성을 조사하기 위함이다. 또한 식물의 광합성 과정에서의 광합성 색소의 역할과 광합성 색소의 종류왿� 최대 흡수파장, 종이 크로마토그래피의 색소 전개 원리를 알아보고 전개율을 계산해보고자 한다.

2. 실험재료 및 방법
<실험재료>
시금치 잎(건조), 여과지, 가위, 막자, 막자사발, 전개용매(석유에테르:아세톤=9:1), 아세톤, 세척용 에탄올, 자, tube rack, spectrophotometer, 석영 Cuvette, 50ml tube, pipette &tip

<실험방법>
1. 건조된 시금치 잎(1-2장) 을 막자 사발로 곱게 간 후, 아세톤 3mL를 넣어 색소를 추출한다.
2. 밑에서 2cm 되는 지점에 중앙에 연필로 표시해둔다.
(여과지는 절대 손으로 만지지 말 것)
밑에서 11cm 되는 부분을 미리 접어 놓는다.
3. Yellow tip을 이용하여 즙액을 묻힌다. 완전히 말린 후 10회 정도 반복한다.
4. 50ml Tube에 전개용액 3ml을 넣은 후 뚜껑을 닫은 후 1~2분 방치시킨다. (포화 상태 만들어주기)
5. 여과지의 끝부분이 용매에 담기게 한 후 뚜껑을 닫아준다.
(점적한 부분이 용매에 직접적으로 담기지 않아야 하고, 여과지가 쫙 펴진 상태로 뚜껑을 닫아야 함)
6. 전개액이 여과지 위에서 1.0cm 정도까지 전개되었을 때 여과지를 꺼내어 색소의 분리를 관찰한다. (용매가 뚜껑까지 도달하기 전에 실험 중지)
7. 여과지를 완전히 말린 후 연필로 각 색소가 이동한 지점을 표시한다.
자를 이용하여 각 색소들의 Rf 값을 계산한다.
8. 다른 색소 밴드가 섞이지 않도록 주의하며 엽록소 a왿� 엽록소 b 밴드를 가위로 잘라낸다. 각각 50ml tube에 넣은 후 아세톤 3ml을 넣고 흔들어 색소를 추출한다.