일반생물학씄험 GFP단백질 정량 실험

이 실험은 아미노산의 펩타이드 결합으로 만들어진 단백질을 정량하는 실험이다. 단백질은 체내에서 효소, 항체 등 생화학적, 구조적 기능을 담당하는 물질로, 실험에서 사용한 것은 시모무라 오사무가 발견한 단백질의 64번과 65번 아미노산을 바꾼 EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)이다. EGFP의 흡광성을 이용해서 단백질을 정량 하기 위해 분광광도계를 사용했고, Labert- Beer's Law왿� 흡광도가 – log (투과율)과 같다는 식을 이용해서 질량농도를 계산했다. 실험에서 사용한 정량법은 EGFP의 3차 구조에 의해 488nm에서 최대흡수 파장을 갖는 것을 이용한 Extinction Coefficient essay왿� Biuret reaction과 Folin reaction 도중 folin reagent가 환원되면서 750nm에서 흡광성을 갖는다는 것과 Standard curve를 이용한 Lowry assay를 사용했다. 실험에는 Spectrophotometer, 1.4mL plastic cuvettes, Foil, 24 well plate, Pipettes(1000p, 20p), Tips(Blue, Yellow tip), 15mL conical tube, e.tube, PBS(Phosphate-buffered saline), Solution A(an alkaline copper tartrate solution), Solution B(a dilute Folin reagent), BSA(Bovine Serum Albumin; 2 mg/ml), EGFP가 사용되었다. Lowry assay를 이용했을 때는 EGFP의 질량농도가 0.075 mg/ml가 나왔고, Extinction Coefficient assay를 이용했을 때는 0.854 mg/ml가 나왔다. 두 결과값의 차이는 Lowry assay가 Tyr, Trp Cys의 수에 따라서 흡광도에 영향을 받으므로..

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