[유전공학실험] A+레포트 / 전기영동 (Agarose gel electrophoresis and elution) 실험레포트

1) 실험 목적
insert DNA왿� vector DNA에 제한효소 처리 후 재조합시키고, 전기영동을 통해 길이를 확인한다.

2) 실험 이론
(1) 전기영동
사진2-1. DNA의 구조
전기영동(electrophoresis)은 전하를 띠고 있는 고분자 물질을 혼합물에서 분리하기 위해 전기장을 띤 망상구조를 가진 젤에서 이동시키는 방법이다. 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법이다. DNA에 있는 인산기(PO4-)에 의해 DNA는 수용액상에서 음전하를 띠고 있기 때문에, 다공성 반 고형상 지지판인 젤 위에 올리고 전기장을 걸어주면 DNA 분자는 지지판 내에서 양극 쪽으로 이동한다. 이 성질을 이용하여 DNA 분자를 크기에 따라 분리할 수 있다.
전기영동을 통해 제한효소로 잘려진 DNA 절편들의 크기를 알 수 있고, 원하는 DNA 절편을 따로 분리하여 사용하거나 제한지도 작성에 편리하게 이용 할 수 있다.

1. 아가로오스 젤 전기영동
사진2-2. 아가로오스 젤 전기영동 원리
아가로오스 젤 전기영동(agarose gel electrophoresis)은 전기영동의 재료로 아가로오스를 사용한다. 우뭇가사리 등의 해초류에서 정제 및 건조한 한천(Agar)은 아가로펙틴과 아가로오스가 주성분인데, 여기에서 아가로펙틴을 제거한 것이 아가로오스이다, 아가로오스를 물에 넣어 끓인 후 굳히면 실험에서 사용할 수 있는 아가로오스 젤이 된다. 아가로오스 젤을 만들고, 크기가 다른 여러 유전체가 혼합된 용액(DNA)은 염색시약과 함께 섞어서 준비해준다. 젤이 완충액에 담겨진 상태로 크기가 다른 여러 DNA가 있는 시료를 홈(well)에 넣고 전장을 걸어주면, –전하를 띠는 DNA 분자는 +극 쪽으로 이동한다.

- 아가로오스 젤 전기영동에 사용되는 재료
① 염색 시약
염색시약(loading dye)으로는 주로 푸른 계열의 브로모페놀 블루(bromophenol blue)왿� 자일렌 사이아놀(xylene cyanol)을 30% 글리세롤 용액에 녹여서 사용한다.