간호학과 미생물학

1. 세균 염색법
① 실험 목적
세균의 형태학적 관찰은 세균의 생사왿� 관계없이 가능하나 크기가 매우 작아 대부분의 빛이 그대로 세균을 통과하므로 투명한 물체왿� 같다. 그래서 세균을 관찰하고자 할 때에는 균을 고정시켜 염색을 한다. 그람염색은 단순염색의 원리를 포함하고 있으며 세균집단을 그람양성과 그람음성으로 구별할 수 있는 감별염색이다. 그람양성균은 자주색으로, 그람음성균은 붉은색으로 염색이 된다. 이러한 특성을 이용하여 A, B, C균이 어떠한 균인지 알아내고, 현미경을 통해 세균의 동정, 분류의 중요한 지표인 그람양성균과 그람음성균을 구분하고, 동시에 분별염색의 원리왿� 조작법을 습득한다.

② 실험 시 필요한 물품(재료)
1. 멸균된 면봉
2. 알코올램프
3. 멸균 생리 식염수
4. Gram stain 시약 : Crystal violet, Gram’s iodine, Aceton alcohol, Safranin
5. Immersion oil (유침유)
6. 종이 타월
7. poly gloves(비닐장갑)
8. 슬라이드 집게, slide lack
9. 스포이드(혈청분리관)
10. 소독용 70%에탄올
11. Slide glass
12. Lens wipe
12. LB한천배지에 18시간 배양한
가) Bacillus subtilis (B. subtilis)
나) Escherichia coli (E. coli)
다) Staphylococcus aureus (S. aureus)
13. 현미경

③ 실험 시 주의사항
1. 고정은 세균이 타지 않도록 불꽃에 두 번 통과하는 정도로만 짧게 한다.
2. 염색의 시간을 잘 지킨다.
3. Washing시, 슬라이드를 반드시 뒤집어서 씻는다.
4. 슬라이드의 물기를 닦을 때 세균을 함께 닦아내지 않도록 한다.
5. 현미경 관찰시 저배율(×100, ×400)에서 고배율(×1000)순으로 한다.
6. 고배율(×1000) 관찰시 시료의 분해능을 높이기 위해 Immersion oil (유침유)를 이용해 관찰한다.
7. 실험 후 현미경 렌즈를 닦고 보관한다.