RNA WORK 결과 보고서

⦁ 실험 목적
DAY1 : Cell을 Lysis(용해)하여 RNA를 추출한다.
DAY2 : 추출한 RNA로부터 상보적인 DNA (cDNA)를 합성한다.
DAY3 : cDNA가닥 중 원하는 가닥을 증폭시키기 위해 PCR을 진행한다.
(특정 gene을 증폭 / 특정 부분에 발현이 일어나는 것을 확인)
DAY4 : PCR을 통해 증폭시킨 DNA를 Electrophoresis(전기영동)을 통해 가닥을 확인한다.

⦁ 실험방법
DAY 1 RNA preparation, RNA quantitative analysis
1. Cell lysate(cell 침전덩어리)를 준비한다. (사전에 원심분리기로 cell을 가라앉힌다.)
2. Easy-BLUE를 400ul 넣고, vortexing 10초 동안 한다.
- Cell을 용해 시키는 용액으로서 Easy-BLUE를 사용하고, vortexing을 통해 세포의 덩어리가(cell lysate) 용액 전체에 퍼지도록 섞어준다.
- Easy-BLUE는 DNA왿� 단백질을 변성시켜 RNase 활성을 억제시키고 RNA분해를 막는다.
3. Chloroform 100ul 넣고, 세게 흔들어서 충분히 섞어준다.
- chloroform에는 phenol이 들어있는데 이것이 단백질과 결합한다. 이후 원심분리기를 진행하면, phenol 단백질 복합체가 가라앉아 RNA층 / 불투명 색의 단백질층 / phenol층이 순서대로 형성되어 나타난다.
4. Centrifuge(13,000 rpm / 10min / 4도) 한다.
5. 새로운 microtube를 준비하여 투명한 상층액만 옮겨준다.
6. Isopropanol 200ul 넣고 위아래로 3-4회 섞어준다. (Inverting)
- Isopropanol은 용해도왿� 휘발성이 낮지만 RNA를 침전시킨다.
7. RNA왿� isopropanol의 반응을 위해RT(상온)에서 10 min 반응시킨다.