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(동국대 의생명공학과) Western blot 및 ELISA 레포트
"Western blot 및 ELISA 레포트"에 대한 내용입니다.
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최초등록일 2022.07.12
최종젿작일
2020.09
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소개
"Western blot 및 ELISA 레포트"에 대한 내용입니다.목차
1. 실험목적
2. 실험방법 및 과정
3. Western blot 실험 원리
4. BCA assay 실험 원리
5. 결과
6. 고찰본내용
1. 실험목적
면역반응 유도를 위해서 면역세포(Raw cell)에 시간대별(control, 10, 20, 30, 60, 90 min)로LPS를 처리함으로써 세포 내 signaling protein(lysate를 이용하여 특히, p-ERK)을 알아보기 위한 실험을 진행한다.
2. 실험방법 및 과정
(1) 6 well plate에 1X10^6 cells/mL(Raw264.7cells : mouse macrophage)를 미리 깔아놓고, 각 cell에 LPS를 1ug/mL씩 처리한다. 처리 시, 각 well당 90 min, 60 min, 30 min, 20 min, 10 min, NT(Non-treat)의 시간을 가지고 LPS를 같은 농도로 처리한다.
(1) -1> 각 Well당 2 mL media에 40u씩 LPS를 Adding한다.
(1) -2> 각 처리 시간에 맞게 Incubator : 90 min, 60 min, 30 min, 20 min, 10 min, NT
(2) (for signal stop) Media를 버리고, 차가운 PBS를 세포 위에 부어준다.
(3) Washing 후, 바로 lysis buffer를 100 ul/well씩 adding하여 세포에서 lysate를 얻는다.
(4) 끈적이는 lysate를 EP tube에 넣어서 보관한다. (labeling도 함께 진행)
(5) Sonication을 5층 실험실에서 뽀얗게 용액이 될 때까지 진행한다.
(6) 거품을 없애기 위해서, Sonication 후, Centrifuge도 진행한다. : 13,000 rpm / 15 min
(7) Incubator에 30 min 동안 보관하여 반응을 진행시킨다.
(8) BCA assay(duplicate) 진행(562 nm)하여, 단백질의 양과 농도를 계산한다.참고자료
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Easy Ai 요약
이 문서는 면역반응 유도 실험을 위해 Western blot과 ELISA 실험을 진행하였습니다. Western blot 실험에서는 LPS 처리 시간에 따른 p-ERK의 발현 양상을 확인하였고, ELISA 실험에서는 LPS 처리 시간에 따른 TNF-α의 분비량 변화를 관찰하였습니다. Western blot 결과, p-ERK는 10-30분 사이에 급격히 증가하다가 30분 이후 감소하는 양상을 보였습니다. ELISA 결과, TNF-α의 분비량은 천천히 증가하다가 30-60분 사이에 급격히 증가하는 것으로 나타났습니다. 이를 통해 LPS 처리에 따른 면역반응 기전을 이해할 수 있었습니다. 실험 과정에서는 단백질 정량, 전기영동, 항체 반응, 검출 등의 기술적 고려사항을 상세히 다루었습니다. 또한 ELISA 실험 결과의 낮은 신뢰도에 대한 원인 분석과 개선 방안도 제시하였습니다. 이 문서는 Western blot과 ELISA 실험의 원리왿 실험 절차, 결과 해석 및 고찰을 종합적으로 다루고 있어 면역반응 실험에 대한 이해도를 높일 수 있을 것으로 판단됩니다. -
자료후기
Ai 리뷰Western blot과 ELISA 실험 과정을 상세하게 설명하고 있으며, 실험 결과를 토대로 유의미한 분석을 제공하고 있습니다. -
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