서강대학껓 현생실2 DNA의 Ligation과 Transformation, Plasmid DNA의 Mini-scale preparation과 제한효소 처리 후 젤 전기영동

 Abstract
이번 실험에서는 DNA ligation을 통해 이전 실험에서 제한효소 처리한 Insert DNA를 pET-21a Vector에 삽입하고, Ligation 결과물을 Competent cell에 열 충격 방법으로 형질전환 한 뒤 Ampicillin 항생제를 포함한 LB plate에서 Colony selection을 진행했다. DNA ligation은 DNA 양 끝의 상보적인 결합으로 일어나게 되며, Phosphodiester bond를 형성하는 T4 DNA ligase의 작용으로 진행된다. Ligation과정 중 한 분자 내에서 발생할 수 있는 Self-ligation이 일어나지 않도록 주의해야 한다. Ligation 후 열충격으로 형질전환 시킨 Sample을 Vector only(pET-21a(+))왿� Vector + Insert plate 두개로 나눠 LB-Ampicillin agar plate에 분주해 원하는 Sample만을 채취한다. 그 후 Colony에서 얻은 Bacteria에서 Mini-scale preparation으로 plasmid DNA를 Kit 방법으로 추출하고 정제하며, Hindlll왿� Ndel 제한효소의 처리로 Insert DNA 부분을 절단해 Agarose gel electrophoresis로 분리하여 그 Band를 관찰한다. LB plate에서, Vector only의 경우 한 개의 Colony, Vector + Insert 에서는 Colony가 보이지 않았는데, 이는 여러 실험적 이유로 나타난 잘못된 결과일 수 있다. Preparation 후 전기 영동 한 결과에서는 Vector왿� Insert DNA가 5443bp왿� 750bp에서 잘 나타났다. 실험적 오류로 인한 Colony 미생성에 관해 고찰해보고, 다른 Selection 방법에 관하여 생각해보았다.

 Introduction
DNA ligase는 Ligase라는 효소 중 하나로..

<중 략>