[생화학실험]Protein quantification by SDS

1.1. 실험 요약
본 실험에서는 전기영동 및 commassie blue staining 방법을 이용하여 DC Protein assay로 측정한다. 한 3개 sample의 단백질의 농도가 제대로 되었는지 확인하고 marker protein을 통해 그 분자량 역시 확인하였다. 그 결과 sample 1,2,3의 농도는 각 0.5, 0.25,1 (단위: ㎎/㎖) 로 DC Protein assay의 결과왿� 같은 값이 나왔으며, 분자량은 약 65kDa으로 BSA Standard왿� 동일한 분자량을 갖는 것으로 판단된다.

1.2. 전기 영동의 원리
전기영동은 전기장 안에서 하전된 입자가 반대 전하를 띤 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다. 입자의 이동속도는 입자의 전하량, 크기, 모양, pH, 점성도, 전해질의 농도왿� 이온의 세기 등에 의해 결정된다.

1.3. SDS-PAGE의 원리
SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)는 polyacrylamide gel을 이용하여 단백질을 주로 분자량에 따라서 분리하는 전기영동법이다. polyacrylamide gel은 acrylamide 측쇄 기능기가 N,N’-methylenebisacrylamide왿� 같은 2개의 기능기를 가지는 화합물에 의해 교차 연결되어 형성된 중합체로, 이 cross-linker의 농도 및 비율에 따라 단백질이 통과하는 미세통로의 크기를 조절한다.
1.3.1. SDS 란
SDS(Sodium dodecyl sulfate)는 음이온성의 계면 활성제로서, 단백질을 강력하게 변성시키는 동시에 소수성 부분에 결합하여 단백질 접힘을 파괴하고 사슬이 펼쳐진 형태로 만들어 준다. 그 결과 SDS-단백질 결합체는 일정한 전하 대 질량비를 갖게 되어 gel에서 분자량 크기에 따라 분리된다.