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[실험기법] 역전사중합효소연쇄반응(RT-PCR)

실험방법, 주의사항까지 일목요연하게 정리하였습니다....8페이짿분량...
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최초등록일 2004.05.17 최종젿작일 2004.05
mRNA DNA 실험방법 RNA
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[실험기법] 역전사중합효소연쇄반응(RT-PCR)
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    소개

    실험방법, 주의사항까지 일목요연하게 정리하였습니다....8페이짿분량...

    목차

    1. RT-PCR의 원리
    (1) mRNA란?
    (2) RT-PCR의 원리

    2. RT-PCR의 방법
    (1) RNA의 추출
    < Trizol Reagent (total RNA isolation reagent)를 이용한 방법>
    Instrustions for RNA isolation
    1.균질화 Homogenization
    1) 조직(Tissue)
    2) Cells grows in monolayer
    3) Cells grows in suspension
    2. Phase separation
    3. RNA precipitation
    4. RNA wash
    5. Redissoving the RNA
    6. RNA 농도 계산

    (2) Reverse transcription
    (3) RCR
    (4) Agarose gel electrophoresis

    <실험실습>
    1. Total RNA extraction
    1) Homogenization
    2) Phase separation
    3) RNA precipitation
    4) RNA washing
    5) Redissolving the RNA

    2. Internal standard 제조
    3. compeitive RT-PCR
    1) Reverse transcription
    2) Polymerase chain reaction
    3) DNA gel electrophoresis

    본내용

    (1) mRNA란?
    어떤 유전자가 세포에서 발현되기 위하여서는 세포질내의 단백제조 공장인 라이보좀으로 유전정보를 전달해 주는 전령 RNA(messenger RNA, mRNA)가 만들어져야 하는데 이 과정을 전사(transcription)라고 하며 RNA 중합효소II (RNA polymerase II)에 의하여 이루어진다. 전사된 RNA는 미성숙 mRNA로서 여러 가지 과정을 거쳐야 성숙 mRNA(mature mRNA)로 변화되는데, 이것을 RNA의 처리과정(processing)이라고 한다. 전령 RNAr의 5‘ 쪽 맨 앞에 마치 모자처럼 G 뉴클레오타이드를 달게되는 capping 이라는 과정을 거치며 3’ 쪽으로는 맨 끝에 수백개의 뉴클레오타이드 A로 된 긴 꼬리를 달게 되는 polyadenylation이라는 과정을 거치게 되며 이 과정 중에 생긴 꼬리를 poly A tail 이라고 한다. 유전정보를 지닌 DNA로부터 전사과정을 거쳐 mRNA가 만들어지고 이것이 라이보좀에 부착되게 되고 mRNA에 실려온 정보를 해독한 후 각 코드에 해당하는 아미노산을 운반 RNA가 운반하여 오는 대로 계속 연결시켜 단백을 만드는데 이 과정을 해독(translation)이라 한다.
    RNA는 기능에 따라 라이보좀 RNA(ribosomal RNA, rRNA, 주로 28S, 18S, 5S), 운반 RNA(Transfer RNA, tRNA)

    참고자료

    · 실험연구기법

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