[동물세포배��] 동물세포배��의 일반적 방법

생존율을 측정하는 경우 주의점은 먼저 세포를 색소에서 염색하는 시간을 검체왿� 함께 일정하게 해야 한다. 염색시간이 지나치게 길면 본래 염색되지 않는 생세포까지도 청색으로 염색되고, 지나치게 짧으면 본래 염색되어야 할 사세포가 염색되지 않는 결과가 된다. 생존율을 측정하는 검체가 많은 때에는 시간차를 두어서 측정하도록 하고 모든 검체가 일정한 염색시간(5분정도)이 되도록 고려해야 한다.
다음에 주의 할 점은 계산할 세포수이다. 계산할 세포의 수가 너무 많으면 카운트할 때 계산의 오차가 생기고, 너무 적으면 생존율의 측정 오차가 크게 된다. 대충 눈대중으로 한 시야에 생세포왿� 사세포를 합해 100개 정도의 세포가 있는 사야에서 계산을 한다. 시야의 세포수가 많을 경우는 PBS로 희석하여 세포수를 줄이든가, 또는 시야의 반 정도 내지 4분의 1의 범위에서 계산한다.
96 well plate 등 매우 소량의 세포의 생세포수를 측정하게 위한 방법은 MTT assay왿� neutral red 법이 있다. MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 담황색의 기질로서, 생세포의 미토콘드리아 내의 호흡쇄효소에 의해 개열하고 암청색의 formazan을 생성한다. 사세포에서는 이 반응이 일어나지 않는다. 생성한 formazan을 0.04N HCl-isopropanol 용액을 사용하여 세포 중에서 추출하여 570nm의 흡광도에서 정량한다. 이 formazan 의 생성량은 생세포수왿� 상관관계가 있으므로, 생세포수 측정에 이용한다. 한편 neutral red (3-amino-7-dimethyl amino-2-methyl-phenazine HCl)는 생세포에 들어가 lysosome에 축척된다. 이 neutral red 축적향은 생세포수에 비례하므로 생세포수의 고감도 측정법으로 이용하게 되었다. MTT assay, neutral red 등은 세포수 측정 키드로서 여러 회사에서 시판하고 있다.