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분자생물생화학씄험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험

"분자생물생화학씄험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험"에 대한 내용입니다.
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최초등록일 2024.04.03 최종젿작일 2022.05
분자생물생화학씄험 IPTG Western blot
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분자생물생화학씄험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험
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    소개

    "분자생물생화학씄험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험"에 대한 내용입니다.

    목차

    Ⅰ. Introduction
    Ⅱ. Materials & Methods
    Ⅲ. Result
    Ⅳ. Conclusion(Discussion)
    Ⅴ. Reference

    본내용

    <IPTG>
    IPTG란, Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside의 약기로 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다[1].
    <Buffer condition>
    Tank buffer
    전기영동장치에 채우는 Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-base)이온이 들어간다. Glycine은 아미노산의 성질로 인해 음전하를 띠거나 net charge가 0인 쌍극성 이온 형태로 존재한다. gel에 형성된 well에 단백질 시료를 가하고 전기영동을 시작하면 Cl-이온과 단백질, Glycine 이온이 모두 (+)극을 향해 출발한다. 그런데 glycine은 stacking gel의 낮은 pH에서 다시 평형을 이루어 일부가 쌍극성 이온이 되어버리기 때문에 이 부분에서 움직이는 이온이 없어지고, 결과적으로 전류가 감소한다. 그러나, 전체 gel의 전류는 유지되어야 하므로 이를 극복하기 위해서 Cl-이온과 glycine 사이에 매우 높은 전압차가 형성된다. 따라서, 상대적인 이동속도는 glycine<단백질<Cl-이 된다. Cl-은 작기 때문에 빠르고, 단백질은 glycine보다 크지만 음전하가 많아서 빠르다. Running gel에서는 glycine은 높은 pH로 인해 거의 모두 음전하가 되고 gel의 농도가 높아 단백질이 크기에 따라 분리가 된다. 따라서, 이동속도는 단백질<glycine<Cl-이 된다[2].

    참고자료

    · 강영희. 2008. 생명과학 대사전. 아카데미서적. p.1980.
    · 한국임상병리교수협의회. 2005. 최신 진단분자생물학실습. 청구문화사. p.35.
    · 김영희. 2018. 분자생물학 실험서. 월드사이언스. p.210.
    · 부성희 외 3명. 2015. 생화학실험. 청문각. p.72.
    · 안정선 외 2명. 2014. 분자생물학. 월드사이언스. p.722.
    · 정해영. 2001. 분자세포생물학*분자의학. 월드사이언스. p.296.
    · 경희대학껓 생물학과 외 공저. 2010. 일반생물학 실험. pp.289, 291.
    · 박용철 외 2명. 2013. 생물학 실험서. 국민대학껓출판부. p.106.
    · 권순일 외 3명. 2016. 임상 분자생물학. 정문각. pp.189-191.

  • Easy Ai 요약

    이 문서는 IPTG를 이용한 대장균 내 재조합 단백질 발현 유도왿 Western blot 분석을 통해 특정 단백질을 검출하는 실험 내용을 자세히 다루고 있습니다. 실험 과정에서 IPTG의 역할, 단백질 추출 방법, SDS-PAGE왿 Western blot 분석 등 각 단계별 원리왿 방법을 상세히 설명하고 있습니다. 또한 실험 결과를 토대로 실험의 성공 여부왿 그에 대한 해석을 제시하고 있습니다. 전반적으로 실험 설계왿 수행, 결과 분석이 체계적이며 실험 보고서로서의 완성도가 높다고 볼 수 있습니다. 따라서 이 문서는 관련 실험을 수행하고자 하는 연구자들에게 유용한 참고 자료가 될 것으로 판단됩니다.

  • 자료후기

    Ai 리뷰
    본 문서는 IPTG를 이용한 대장균 내 재조합 단백질 발현 유도왿 Western blot 분석을 통해 특정 단백질을 검출하는 실험 내용을 잘 정리하고 있습니다.

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