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현대생물학씄험4 wnt/B-catenin signaling activation full report
현대생물학씄험4 "wnt/B-catenin signaling activation full report" 고득점 자료 입니다.(A0) 도움이 됐으면 좋겠습니다.
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최초등록일 2024.05.05
최종젿작일
2023.10
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소개
현대생물학씄험4 "wnt/B-catenin signaling activation full report" 고득점 자료 입니다.(A0) 도움이 됐으면 좋겠습니다.목차
1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Data & Result
5. Discussion
6. Reference본내용
형광현미경으로 transfection의 효율을 확인하고 B-catenin inhibition 인자를 inhibition 하여 western blot, image J를 이용해 B-catenin 발현량 증가를 확인해 본다.
Transfection은 동물세포 내로 외부 유전물질을 도입하는 것을 의미한다. Polymer, liposome 등의 물질을 이용하여 DNA왿 membrane 사이의 전기적 반발력을 억제한 후 세포 내로 도입 시킬 수 있다. 세포막을 파괴하여 세포의 구성요소를 노출시켜 Lysate를 얻는 과정을 cell lysis라고 한다. Bradford assay는 농도를 미리 알고 있는 sample과 흡광도 간의 관계식을 얻어내 미지 시료의 농도를 결정하는 기법이다. Western blot은 항체를 이용하여 단백질을 분석, 검출해내는 방법이다. Cell로부터 얻은 단백질을 size 별로 분리하고 membrane에 옮긴 후 blocking하여 항체를 처리한다. 2차 항체에 alkaline phosphatase(AP)가 conjugation 되어 있는데 BCIP/NBT Solution을 넣어주면 AP가 이왿 반응해 색소를 형성한다. 이로 인해, detection이 가능하다.
먼저, HEK293T cell을 배양하고 Human -catenin(GFP-tagged) plasmid를 HEK293T cell에 transfection 한다. Cell lysis를 통해 lysate를 얻어내고 Bradford assay를 이용해 농도를 결정한다. 이후, SDS-PAGE를 진행하여 단백질을 size별로 분리해낸 후 PVDF membrane을 이용해 transfer과정을 진행한다.참고자료
· Li, V. S., Ng, S. S., Boersema, P. J., Low, T. Y., Karthaus, W. R., Gerlach, J. P., ... & Clevers, H. (2012). Wnt signaling through inhibition of β-catenin degradation in an intact Axin1 complex. Cell, 149(6), 1245-1256
· Montecinos-Franjola, F., Bauer, B. L., Mears, J. A., & Ramachandran, R. (2020). GFP fluorescence tagging alters dynamin-related protein 1 oligomerization dynamics and creates disassembly-refractory puncta to mediate mitochondrial fission. Scientific Reports, 10(1), 14777
· Barber, R. D., Harmer, D. W., Coleman, R. A., & Clark, B. J. (2005). GAPDH as a housekeeping gene: analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues. Physiological genomics, 21(3), 389-395
· Romero-Calvo, I., Ocón, B., Martínez-Moya, P., Suárez, M. D., Zarzuelo, A., Martínez-Augustin, O., & de Medina, F. S. (2010). Reversible Ponceau staining as a loading control alternative to actin in Western blots. Analytical biochemistry, 401(2), 318-320태그
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Easy Ai 요약
이 문서는 동물세포에서 외부 유전물질 도입 방법인 transfection 기법을 활용하여 β-catenin 단백질의 발현 양상을 관찰하고 분석한 실험 내용을 기술하고 있다. 먼저, HEK293T 세포에 GFP-tagged β-catenin 플라즈미드를 transfection하고 형광현미경으로 관찰하여 세포 내 β-catenin의 위치를 확인하였다. 이후 LiCl 처리를 통해 β-catenin 분해 억제 효과를 유도하고, Western blot과 Image J 분석으로 정량적인 발현량 변화를 측정하였다. 실험 결과, LiCl 처리 시 β-catenin 발현량이 약 1.2배 증가하는 것으로 나타났다. 이는 LiCl이 β-catenin 분해를 억제하여 세포 내 축적을 유도하기 때문인 것으로 해석된다. 실험에 사용된 다양한 기법들, 즉 transfection, cell lysis, Bradford assay, SDS-PAGE, Western blot, Image J 분석 등은 세포 내 단백질 발현 조절 기작을 연구하는 데 널리 활용되는 핵심 기술들이다. 이번 실험을 통해 이러한 기법들의 원리왿 적용 방법을 자세히 확인할 수 있었으며, 특히 Western blot과 Image J를 이용한 정량적 분석 기법은 세포 내 단백질 발현 변화를 정밀하게 측정할 수 있는 강력한 도구라고 볼 수 있다. 전반적으로 이 문서는 세포 내 단백질 발현 조절 기작 연구에 활용되는 다양한 실험 기법들을 상세히 소개하고 있으며, 특정 단백질(β-catenin)의 발현 변화를 정량적으로 분석한 내용을 제시하고 있어 관련 연구 분야에 유용한 정보를 제공할 것으로 기대된다. -
자료후기
Ai 리뷰이 문서는 transfection, cell lysis, Bradford assay, SDS-PAGE, Western blot 등 다양한 생물학적 실험 기법을 상세히 설명하고 있으며, 실험 결과를 체계적으로 분석하여 제시하고 있다. -
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