[화학과 수석의 A+ 레포트][조교피드백 포함] 전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학씄험)

1. 실험 목적
이번 실험에서는 전기영동 gel을 만들고 염색된 단백질 sample을 전기영동 한다.

2. 이론
전기영동이란 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동 하는 화학현상이다. 전기영동법에는 대표적으로 겔 전기 영동법과 모세관 전기영동법등이 있 으며, 그중 이번 실험에서 할 겔 전기 영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용하기 시 작할 당시의 전기영동법의 초기 형태이다. 그러나 모세관 전기 영동법에 비해 이온이 지나가 는 폭이 넓기 때문에 같은 전압이 걸릴 경우 저항이 작아 열이 발생하는 단점이 있다.

gel을 만드는 방법은 다음과 같다. acrylamide왿� bisacrylamide를 혼합 후 persulfate를 넣 어서 고분자 중합을 개시한다. polymerization이 개시되면 acrylamide왿� bisacrylamide가 가교되어 gel이 형성되는데, 이때 bis acrylamide가 중간 가교 역할을 하게 된다. 가교반응이 빠르게 일어나도록 도왿�주는 촉매로서 TEMED 시약도 첨가한다. gel 제조시 acrylamide의 농도를 조절하면 gel의 pore size도 조절할 수 있다. acrylamide의 농도가 높을수록 pore size가 작게 만들어져 단단한 gel 이 형성되며 농도가 높을수록 pore size가 크게 만들어져 물렁물렁하고 잘 찢여지는 gel이 형성된다. 참고로 실제로는 acrylamide의 농도가 8~12%인 gel을 가장 많이 사용하며, 단백질의 크기가 작을때는 15% 농도의 gel을 사용하기도 한다. upper gel은 주로 4~5% 농도의 acrylamide로 구성되며 시료를 모아 단백질 밴드를 잘 정렬 시켜 단백질 분리에 앞서 출발선을 맞추는 역할을 하고, lower gel은 주로 10~15% 농도의 acrylamide로 구성되어 단백질이 크기에 따라 분리가 잘 일어나도록 하는 역할을 한다.