[A]서강댿�학껓 현대생물학씄험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis

Target gene을 임의의 vector에 삽입한 다음 세포에 주입하여 증폭시키는 기법을 Cloning이라 하며, 본 실험에서는 T vector를 이용하여 TA cloning을 진행하고, 추출하여 얻어낸 plasmid DNA의 insert DNA를 다시 회수하는 것을 목적으로 한다. Vector왿� insert는 molar ratio 1:3으로 1.8ul를 주입해주었으며, T-vector에 insert DNA가 정상적으로 들어갔는지 Lac-Z selection을 통해 blue colony왿� white colony가 생성된 것을 확인하였으며, 그 중 white colony를 따서 Alkaline lysis Mini-Prep기법을 통해 Alkaline 상태에서 plasmid DNA과 linear DNA의 denaturation 정도가 다른 것을 이용해 plasmid DNA를 분리하였다. 분리된 plasmid DNA의 전기영동 결과는 4500bp왿� 2000bp의 band를 형성하며, plasmid DNA의 다양한 conformation으로 인해 나타나는 것을 확인하였으며, 제한효소인 HindⅢ왿� NdeⅠ를 이용하여 plasmid DNA에 들어있는 insert DNA를 분리해주었다. 전기영동을 통해 알아본 enzyme cut 결과는 750bp왿� 3000bp에서 band가 형성됨을 관찰할 수 있고, 이는 제한효소 처리가 정상적으로 이뤄짐을 의미한다. Uncut의 다양한 band는 plasmid DNA의 여러가지 conformation으로 인해 나타난 결과이고, 이후 사용할 pET21a vector도 절단하였다. 흡광도왿� Beer-Lambert Law를 이용하여 구한 insert DNA농도는 6.5ug/ml이고 vector DNA농도는 9.75ug/ml임을 알 수 있다. alkaline phosphatase를 주입하여 5’의 phosphate를 제거