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현대생물학실험4 Tobacco infiltration full report
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최초등록일 2024.11.02
최종젿작일
2023.12
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소개
현대생물학실험4 "Tobacco infiltration full report" 고득점 자료 입니다.(A0) 도움이 됐으면 좋겠습니다.목차
1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Data & Result
5. Discussion
6. Reference본내용
Abstract
Agrobacterium-mediated transformation을 이용해 담배잎 내로 목적 유전자를 도입하여 식물 형질전환을 유도하고 세포 내 목적 단백질의 발현을 관찰해보며 목적 단백질의 활성으로 생성된 TAG를 TLC를 통해 분리해내고자 한다. A.tumafaciens의 한 strain인 GV3101로 목적 유전자(DGAT1, WRI1, MAGL4, MAGL10)왿 reporter gene(eYFP)가 fusion된 Plasmid를 도입하고 이러한 GV3101을 이용해 담배잎 식물 세포의 형질전환을 유도할 수 있다. 항생제 저항성 유전자를 가진 colony PCR을 이용해 Agrobacterium에 목적 유전자가 도입되었는지 확인할 수 있다. Reporter system을 이용해 세포 내 목적 단백질의 활성을 형광현미경으로 관찰할 수 있다. Nile staining을 통해 중성 lipid를 염색하여 확인 가능하다. TLC는 sample과 전개용매왿 TLC plate 사이의 affinity 차이를 이용해 원하는 물질을 분리해내는 방법이다.
Agrobacterium을 competent cell로 만든 후, 목적 유전자가 cloning 되어 있는 Plasmid를 세포 내로 도입시킨다. 형질전환된 agrobacterium을 항생제 배지를 이용해 선별해내고 형광단백질을 이용해 세포 내 목적 단백질의 발현을 확인한다. 실제 관찰된 위치왿 프로그램을 이용해 예측한 세포 내 위치를 비교해본다. 형질전환된 agrobacterium을 식물 세포로 infiltration 시키고 TAG 생합성을 유도하여 TLC를 통해 TAG를 분리해 내고 염색하여 결과를 확인한다.
플라스미드의 농도에 따라 agrobacterium 형질전환 효율을 계산해 보았고 세포 내 형광신호를 관찰한 결과왿 프로그램에서 예측한 결과를 비교해 보았다. TLC 결과를 통해 TAG가 잘 분리되었는지 확인해 보았다.참고자료
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· Shockey JM, Gidda SK, Chapital DC, Kuan JC, Dhanoa PK, et al. (2006) Tung tree DGAT1 and DGAT2 have nonredundant functions in triacylglycerol biosynthesis and are localized to different subdomains of the endoplasmic reticulum. Plant Cell, 18: 2294–2313.
· K. Ryeo Jin, K. Hae Jin, S. Donghwan, S. Mi chung(2016), Molecular and biochemical characterizations of the monoacylglycerol lipase gene family of Arabidopsis thaliana, The Plant Journal, 85(6): 758-771.
· P. Horton, Keun-Joon P., T. Obayashi, N. Fujita, H. Harada, C.J. Adams-Collier, K. Nakai(2007), WoLF PSORT: protein localization predictor, Nucleic Acids Research, 35(2): W585-W587.태그
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Easy Ai 요약
이 문서는 Agrobacterium-mediated transformation 기술을 이용하여 담배 잎 내로 목적 유전자(DGAT1, WRI1, MAGL4, MAGL10)왿 reporter gene(eYFP)이 융합된 플라스미드를 도입하고 이를 통해 식물 형질전환을 유도하였다. 형질전환된 Agrobacterium을 선별하기 위해 항생제 저항성 유전자왿 colony PCR 분석을 수행하였고, 세포 내 목적 단백질의 발현은 reporter system을 이용한 형광현미경 관찰을 통해 확인하였다. 또한, Nile staining과 TLC 분석을 통해 형질전환체에서 생성된 TAG를 분리하고 분석하였다. 실험 결과, 플라스미드 농도에 따른 Agrobacterium 형질전환 효율 차이왿 예측된 단백질 위치왿 실제 관찰된 위치의 차이를 확인할 수 있었다. TLC 분석 결과 WRI1과 DGAT1이 과발현된 경우 TAG 생산량이 가장 높은 것으로 나타났다. 이를 통해 목적 유전자의 도입과 발현, 그리고 그에 따른 생합성 산물의 생산 및 분리가 효과적으로 이루어졌음을 확인할 수 있었다. 본 실험 결과는 향후 식물 유래 유용 물질 생산을 위한 대사공학 연구에 활용될 수 있을 것으로 기대된다. -
자료후기
Ai 리뷰본 실험은 식물 형질전환 기술을 활용하여 목적 단백질의 발현과 생성물을 분석하고자 하였으며, 실험 결과를 통해 목적 단백질의 세포 내 위치왿 TAG 생산량을 확인하였다. -
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