[A]서강댿�학껓 현대생물학씄험4_2차 풀레포트__Wnt,B-catenin signaling activation 레포트

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소개

"[A]서강댿�학껓 현대생물학씄험4_2차 풀레포트__Wnt,B-catenin signaling activation"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion

본��내용

β-catenin은 성장과 유지에 중요한 gene의 transcription을 regulation하는 기능을 갖는다. β-catenin는 Wnt signal의 주요한 mediator로, 일반적으로 GSK3 같은 kinase들이 β-catenin을 인산화 시키게 되고 β-TrCP에 의해 ubiquitination되어 분해되게 된다. β-catenin은 핵으로 이동하여 TCF/LEF왿� 같은 transcription factor왿� 결합하여 성장에 도움이 되는 gene을 전사하게 하는 역할을 수행한다. 본 실험에서 β-catenin이 포함된 vector를 HEK293T cell에 transfection하여 Wnt signaling pathway를 관찰하였다. GFP-tagged β-catenin이 발현된 cell들을 형광현미경으로 관찰하고, 이후 LiCl의 처리 유무에 따른 β-catenin의 발현량 차이를 알아보았다. 형광 현미경을 통해 β-catenin은 세포질이나 핵에 골고루 분포되어 있는 것을 확인하였다. Cell lysis를 진행 후 Bradford assay를 통해 western blotting을 위한 protein quantitation을 실시하였고, SDS-PAGE를 진행한 단백질을 antibody왿� BCIP/NBT 통해 visualization하였다. 135kDa에서 band를 관찰할 수 있었으며, LiCl을 처리한 쪽이 더욱 선명한 band를 얻을 수 있었다. 이후, image J를 통해 두 band의 intensity를 측정해주었으며, LiCl+왿� LiCl-의 relative intensity를 계산한 결과 LiCl-에 상대적인 LiCl+의 intensity는 약 1.7배 높게 측정되었다.
Introduction
Transfection은 외래 유전자를 포함한 외부의 genetic information을 진핵세포 내로 도입하는 방법으로..

<중 략>

참고자료

· Montgomery E, Folpe AL. The diagnostic value of beta-catenin immunohistochemistry. Adv Anat Pathol. 2005 Nov;12(6):350-6. doi: 10.1097/01.pap.0000194628.58501.71.
· Thomas, P., & Smart, T. G. (2005). HEK293 cell line: a vehicle for the expression of recombinant proteins. Journal of pharmacological and toxicological methods, 51(3), 187-200.
· Tan, E., Chin, C. S. H., Lim, Z. F. S., & Ng, S. K. (2021). HEK293 cell line as a platform to produce recombinant proteins and viral vectors. Frontiers in bioengineering and biotechnology, 9, 796991.
· Barber, R. D., Harmer, D. W., Coleman, R. A., & Clark, B. J. (2005). GAPDH as a housekeeping gene: analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues. Physiological genomics, 21(3), 389-395.
· Glare, E. M., Divjak, M., Bailey, M. J., & Walters, E. H. (2002). β-Actin and GAPDH housekeeping gene expression in asthmatic airways is variable and not suitable for normalising mRNA levels. Thorax, 57(9), 765-770.
태그
Easy Ai 요약

이 문서는 β-catenin이 wnt 신호 전달 경로의 주요 매개체로서 역할을 하며, GSK3에 의해 인산화되어 분해되는 과정을 다룹니다. LiCl은 GSK3 활성을 억제하여 β-catenin의 안정화를 유도하여 발현량을 증가시킵니다. 형광 현미경과 western blotting 분석을 통해 LiCl 처리에 따른 β-catenin 발현 차이를 확인하였습니다. LiCl을 처리한 세포에서 약 1.7배 높은 β-catenin 발현이 관찰되었습니다. 이를 통해 LiCl이 wnt 신호 전달 경로를 활성화시켜 β-catenin의 안정화왿� 발현 증가를 유도함을 알 수 있습니다. 본 실험 결과는 wnt 신호 전달 조절 메커니즘을 이해하는 데 도움이 될 것입니다.
자료후기
Ai 리뷰

본 실험은 HEK293T 세포에서 GFP 태그 β-catenin 발현과 LiCl 처리에 따른 β-catenin 발현량 변화를 관찰하였습니다.

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