생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 4. LB 배지 만들기

1. 실험 목적: 대장균의 형질 전환을 위한 배지를 준비한다.

2. 실험 재료 및 기구: LB broth, Bacto agar, 250mL 비커, D.W(500ml), Autoclave, 멸균테이프, 호일, 전자저울, 네임펜, peri dish, 약 숟가락, Ampicillin

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3. 방법
가.   LB 배지 만들기 (100mL)
① Autoclave 돌릴 때, 넘칠 것을 방지해서, 250mL 비커를 준비한다.
② 비커에 D.W 100mL왿� LB를 2.5g (100mL 기준) 넣어준다.
③ 비커 입구를 호일로 막고, labeling을 한 뒤 멸균 테이프를 붙인다.
④ Autoclave에서 121°C에서 15분간 멸균한다.
(121°C까지 Autoclave 온도가 상승하기 위해서는 약 1시간 30분 정도의 시간이 소요된다.)

나. LB plate 만들기 (500mL)
① 과정 ‘가’ 방법으로 액체 LB 배지를 제조한다.
② Agar를 1.5%가 되게, 7.5g (500ml 기준) 넣는다.
③ 삼각 플라스크 입구를 호일로 막고, labeling을 한 뒤 멸균 테이프를 붙인다.
④ Autoclave에서 121°C에서 15분간 멸균한다.
(121°C까지 Autoclave 온도가 상승하기 위해서는 약 1시간 30분 정도의 시간이 소요된다.)
⑤ Labeling한 petri dish에 autoclave 돌린 LB media를 agar가 굳지 않을 정도로 식힌 후 (약65°C ~ 70°C) 50 ug/ml Ampicillin을 넣고 섞는다.

과정④ 용액 500mL에 Ampicillin을 농도 50 ug/ml가 되도록 넣어야 한다.
X : 500mL=50ug : 1mL
X = 2500ug
X = 25mg 이다.
실험에 사용한 Ampicillin 농도는 10mg/mL 이므로, 25mg을 첨가하기 위해선 Ampicillin 10mg/mL를 2.5mL 넣어야 한다.