[A+] 2023 서강대 일반생물학씄험1 2차 (GFP 단백질 정량)

1. Abstract
이 실험은 Lowry assay왿� Extinction coefficient assay를 통해 EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein) 단백질을 정량하고 그 결과를 비교해보기 위함이다. Lowry assay에서는 각각 다른 농도의 BSA(Bovine Serum Albumin) 용액을 만들어 흡광도를 측정하고 표준곡선을 그려 단백질 농도를 계산하며 Extinction coefficient assay에서는 EGFP 단백질의 고유한 488nm에서의 높은 흡광도왿� 흡광계수를 이용하여 농도를 구할 수 있다. 750nm에서 측정된 DIW 480µl왿� 20µl EGFP가 섞인 용액의 흡광도는 0.057로 Lowry assay를 통해 EGFP의 질량농도를 구한 결과 0.49mg/mL로 계산되었고 488nm에서 960µl PBS(Phosphate-buffered saline)왿� 40µl EGFP가 섞인 용액의 흡광도는 0.013으로 Extinction coefficient assay를 통해 구한 결과 0.143mg/mL로 계산되었다. 계산 결과에 차이가 나는 까닭은 정량방법에 따라 아미노산에 영향을 받는 방법이 있기 때문이다. 또한, EGFP왿� 같이 280nm를 제외한 특정한 파장에서 높은 흡광도를 갖는 경우 Extinction coefficient assay의 결과값이 상대적으로 더 오차가 적을 수 있기 때문이기도 하다. 실험의 정확도를 높이기 위해서는 정확한 BSA 표준곡선을 그리기 위해 용액들의 반응속도를 최대한 일정하게 맞추고 용액이 균일하게 섞이도록 해야 하며 Lowry assay를 개량하여 보다 높은 정확도를 가지는 단백질 정량 방법을 이용할 수도 있다.
2. Introduction
단백질은 아미노산의 펩타이드 결합으로 만들어지는 폴리펩타이드들이 모여 만들어지는 것으로 생명체 내에서 화학반응을 촉진시키는 촉매의 역할을 하거나 저장, 신호전달, 방어 등의 기능을 수행한다.