Genomic DNA 정제

Genomic DNA정의 / 특징
Genomic DNA정의
Genomic DNA란?
어떤 생물종의 전체DNA를 Genomic DNA라고 함
Plasmid DNA , cDNA왿� 구분하여 사용하는 말.
(예) 인간일경우 : 23개의 염색체 세트를 genome이라 함
Gene(유전자)랿�?
유전자란 말은 DNA 중에서 단백질로 정보가 표현되는 부분을 말하는데, 정의를 내리자면, 한 세대에서부터 다음 세대로 그 개체의 모든 생물학적 정보를 전달해주는 물리적, 기능적인 단위
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Plasmid DNA란?
Plasmid는 박테리아 세포 내에 독립적으로 존재하는 환형의
DNA 분자
구 분
Genomic DNA
Plasmid DNA
크 기
1000 kb-9000kb
1kb∼250kb(다��함)
모 양
다 양 함
환형의 DNA 분자이다
기 타
생물체에 필요한 모든
유전정보를 지님
replication origin을 지님
Genomic DNA/Plasmid DNA 차이점
Genomic DNA정의 / 특징
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② 72hr 배양한 cell을 cell down 하여 얻어진 pellet에 ① (550㎕)을
넣고 완전히 녹인 후, 새 e-tube에 그대로 옮겨 넣는다.
① 0.2M Tris-cl (pH7.6) + 0.1M EDTA + 0.4M Nacl + protease K
(tip으로 살짝) (500㎕ ← 10 % SDS 50㎕ )
③ 65℃ waterbath에서 30 min 방치
④ phenol 600㎕를 첨가하여 흔들어서 섞어준 후 원심분리 5min
=>상층액은 새 tube 에 옮긴다.
⑤ phenol 500㎕를 첨가하여 흔들어서 섞어준 후 원심분리 5min
=> 상층액은 새 tube에 옮긴다
실 험 과 정
Genomic DNA purification protocol
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Genomic DNA purification protocol
⑦ 원심분리 3min. 상층액 따서 다시 위 ⑥ 번 첨가후 원심분리 3 min
⑥ chloroform : isoamyalcohol (24:1) 500㎕ 첨가
⑧ 상층액 transfer
⑨ 3M sodium acetate 50㎕ 첨가. 1ml ethanol 첨가
⑪ pellet + 70% ethanol 500㎕ (wash)
※ pellet이 떨어지지 않도록 ethanol 조심스럽게 첨가후, 바로 버리기
⑫ air dry (ethanol 제거)
실 험 과 정