단백질의정량

1. 실험날짜 : 2008년 4월 3일 목요일 오전 9시 ~ 11시

2. 실험제목 : Macromolecules: Proteins, Carbohydrates, Lipids

3. 실험목적 : 세포를 이루는 분자는 단순한 구조왿� 기능을 가지고 있는 유기분자들이 모여서 거대분자 (macromolecule)를 형성한다. 세포 내 거대분자는 크게 단백질 (proteins), 탄수화물 (carbohydrates), 지질 (lipids), 핵산 (nucleic acid)으로 나뉜다. 단백질은 원형질과 효소의 구성요소이며, 탄수화물은 에너지원으로 중요한 역할을 한다. 지질은 모든 생체막 (biomembrane)의 주요 성분이며 에너지원이다. 이러한 거대분자에 대한 생화학적인 확인과 구조에 대한 이해는 세포내 분자들의 기능 및 작용 기전을 분자 수준에서 이해하는데 필수적이다.
세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 실험 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다.

4. 이론
① The Bradford Method for Protein Quantitation of Milk.
이 방법은 ribonuclease나 lysozyme같은 적은 분자량의 염기성 polypeptide를 제외한 대부분의 단백질의 정확한 정량에 사용된다. 하지만 이 방법은 시료 안에 0.2%이상의 detergent (예를 들면, Triton X-100, SDS, NP-40 등)가 존재할 경우 결과가 정확하지 못한 단점이 있다.
② spectrophotometer (분광광도기)
특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도를 측정하는 기기, 즉 색의 혼탁도로써 농도를 측정하는 것으로, 처음 들어간 L0왿� 나온 L의 빛의 차이를 가지고 판단한다. 그렇기 때문에 색이 너무 짙어질 경우에는 어느 것이 더 혼탁하고 덜 혼탁한지를 구분해 낼 수가 없다.
OD값은 spectrophotometer에서 측정하는 혼탁도로써 “OD x” 라고 나타나며, 저 x가 1을 넘게 되면 saturation이 되어 정확한 값을 알 수 없게 된다는 한계가 존재한다.
먼저 농도를 알고 있는 시약들의 OD값을 측정하여 graph로 도표화 하면, 어떠한 대체적인 함수식을 얻을 수 있다. 그 후 미지의 시료의 OD값을 측정하여 graph를 통해 나온 함수를 이용한다면, 미지의 시료의 농도를 알 수 있다.