Preparation and Concentration Determination of Plasmid DNA from E. coli -Mini- Scale Preparation(E.c

1. 실험제목 : Preparation and Concentration Determination of Plasmid DNA from E. coli -Mini- Scale Preparation

2. 실험날짜 : 2004년 11월 20일 토요일

3. 제출자 및 공동 실험자

4. 목적
☞ E.coli로부터 plasmid DNA를 alkaline lysis를 통해 분리해 내고 분리해 낸 plasmid DNA의 농도를 알아본다.

5. 원리
☞ Plasmid
Plasmid는 chromosomal DNA왿�는 별도로 bacteria 세포 내에서 발견되는 작은 DNA로 chromosomal DNA왿� 비교해 볼 때 크기가 상당히 작고(4-100kb) 스스로 복제가 가능하다. 자연계에서 plasmid는 항생물질, 중금속, mutagen, bacteriophage 등에 대한 내성 유전자를 운반하거나 제한 효소, unusual amino acid를 생산하기도 하며, 복잡한 유기화합물을 분해하는 유전자를 가지고 있는 경우도 있다. 일부 plasmid는 접합 과정(conjugation)을 통해 다른 bacteria 세포로 옮겨갈 수 있다. 따라서 인위적으로 plasmid를 다른 bacteria 세포에 감염시킬 수 있고, 이를 이용하여 유전형질을 쉽게 변환시킬 수 있으며, 순수하게 분리 정제하기도 쉽기 때문에 plasmid는 현대 분자생물학에서 가장 널리 사용되는 유용한 도구가 되고 있다. 분자생물학에서 cloning vector로 사용되는 plasmid는 replication origin, selectable marker, (multi) cloning site의 3가지 공통요소를 가지고 있다. Replication origin는 DNA 복제가 시작되는 부위이고, selectable marker는 대개 항생물질에 대한 내성을 나타내는 유전자를 encode하는 부분이며, plasmid가 전이된 세포를 selection 할 수 있게 해준다. Cloning site는 plasmid의 복제 능력 등에 형향을 주지 않으면서 외부 DNA를 삽입시키기 위한 제한 효소 절단 부위이다.